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1、激活态雪旺细胞对神经干细胞分化作用的研究哈尔滨医科大学附属第四医院骨科，黑龙江哈尔滨150086［摘要］目的探讨激活态雪旺细胞（SCs）对神经干细胞（NSCs）的分化作用。方法取出生24h内的SD乳鼠脊髓NSCs,分离培养并传至4代。取体重（100±5）g的SD大鼠，结扎右侧坐骨神经，1周后取双侧坐骨神经，左侧提取正常坐骨神经分离培养SCs（普通SCs）,右侧提取结扎变性的坐骨神经分离培养SCs（激活态SCs）,均采用双酶消化加差速贴樂法。将SCs与NSCs应用Transwell培养皿联合培养，分为三组：A组为激活态SCs与NSC
2、s；B组为普通SCs与NSCs；C组仅为NSCs。于培养的第2、4、6天检测各组NSCs活性。1周后,Westernblot检测各组SCs表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达水平，免疫荧光检测各组NSCs分化比例。结果传至4代的NSCs生长稳定，分离的SCs7d后大量增殖呈旋涡状。联合培养后MTT法检测细胞活性，第2、4天三组细胞的活性差异无统计学意义（P>0.05）,第6天C组活细胞比例开始降低，A、B组与C组比较差异有统计学意义（P0.05）oWesternblot检测A组细胞表皮生长因子（EGF）
3、表达水平（0・486±0.028）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达水平（0.385±0.023）均高于B组，差异有统计学意义（P〈0.05）。MAP-2荧光染色，每高倍视野阳性细胞比例A组［（35.26±2.53）%］高于8组［（27.63±3.45）%］,差异有统计学意义（P<0.05）；GFAP荧光染色，每高倍视野阳性细胞比例A组［（62.42±3・78）%］低于B组[(70.18±1.26)%],差异有统计学意义(P<0.05)o结论激活态SCs能够促进NSCs向神经元的分化进程，提高神经元的分化比例。［关键词］雪旺
4、细胞；神经干细胞；细胞分化；联合培养；神经元［中图分类号］R741.02［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2014)03(a)-0019-04EffectofactivatedSchwarmcellsininducingdifferentiationofneuralstemcellsZHANGRuiZHANGJunZHAOChengbinDepartmentofOrthopedic,theFourthAffi1iatedHospitalofHarbinMedicalUniversity,HeilongjiangPro
5、vince,Harbin150086,China［Abstract］ObjectiveTodiscusstheeffectofactivatedSchwanncells(SCs)inthedifferentiationofneuralstemcells(NSCs)・MethodsThespinalcordofSDratwastakeninthe24hoursafterbirth・TheNSCsfromspinalcordwereseparatedandcultureduntilthefourthpassage・(100±5)gSD
6、ratwasusedtoligaturetherightsciaticnerve.Afteroneweek,boththerightandleftsciaticnervewereisolatedtocultureSCsbydoubleenzymesdigestionanddifferentialattachment.TheSCsfromtherightsciaticnervewerenamedactivatedSCs,andtheonesfromtheleftsidecalledcommonSCs.ThentheSCsandNSC
7、swereco~culturebyTranswellculturedish,andtheyweredividedintogroupA,groupBandgroupC・groupAwasactivatedSCsandNSCs,groupBwascommonSCsandNSCs,andgroupCwasjustNSCsascontrol.Thecytoactivewasdetectedatthesecond,fourthandsixthdays・Oneweeklater,theEGFandbFGFsecretedbySCswerede
8、tectedinWesternblot,andthedifferentiationratioofNSCswasdetectedbyimmunofluorescence・ResultsThefourthpassageNSCsgrewstably,an
