mirna let-7f对大鼠神经干细胞分化的调控作用

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1、中图分类号UDCR72610硕士学位论文学校代码!Q5三3miRNAlet．7f对大鼠神经千细胞分化的调控作用InVolVementofmiRNAlet一7fintheRegulationofNeuralStemCellsDifferentiationinRats作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：韦玉佳临床医学儿科学湘雅医院王霞副教授答辩委员会主席纽中南大学2013年5月本课题获得以下资助：国家自然科学基金(No．30801246)原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论

2、文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：蔓至!垒日期：坦f墨年丛月丝日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，

3、并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：壶鸯丝导师签名立左．．日期：2＆&年堕月丛日m订冰Alet．7f对大鼠神经千细胞分化的调控作用摘要目的：近年来的研究表明，miRNAlet_7在神经细胞分化过程中表达增加，提示miRNAlet-7家族可能参与调控神经干细胞(new“Stemcells。NSCs)分化过程，但mi砒姒1et．7f在NSCs分化中的作用尚未见报道。本研究将观察miIⅢA1et．7f在大鼠NSCs分化过程中的表达和调控作用。方法：1、应用实时荧光定量PCR(real．timefluorescenetqu州tatiVePCR，啦汀．PC

4、R)技术对出生后1d、8d、14dSD大鼠脑组织中的miI斟A1et．7f进行分析，蛋白印迹法(westemblot，WB)检测GFAP、Tujl、nestin的变化：2、取胎鼠脑组织进行NSCs体外分离、培养及诱导分化，在分化后Od、3d、5d、7d分别观察miI冰Alet-7f、GFAP、Tujl、nestin的变化；3、构建大鼠miIⅢA1et一7f1nh-bition及miI潮A1et．7鼻1慢病毒载体，体外转染胎鼠NSCs，转染细胞分为对照组、空载体组(EGFP)、下调组(miRNA1et-7fInlljbition)、上调组(miRNAlet

5、．7S1)，转染NSCs72h后观察各组nestin的表达情况，转染NSCs后诱导分化7d，观察GFAP、Tujl的表达变化。结果：1、随着日龄的增加，SD大鼠脑组织nestin的表达逐渐减少，miRNAlet_7f、GFAP、Tujl的表达逐渐增加；2、成功培养出胎鼠NSCs，并在体外诱导分化，随着NSCs分化天数的延长，IInestin的表达逐渐下降，mi心峪l醵7f、GFAP、Tujl的表达逐渐升高；3、在MOI=50，病毒滴度为1×108TU佑1L，完全培养基条件下，慢病毒成功转染NSCs，48h后开始表达绿色荧光蛋白(EGFP)，72h后荧光强

6、度达到最大，并在诱导分化后仍能稳定表达；4、慢病毒转染72h后，下调基因组nestin表达量明显高于其余三组，上调基因组nestin表达最低，差异均有统计学意义(P<0．05)：慢病毒转染NSCs后诱导分化7d，上调基因组GFAP、T巧1的表达明显高于其余组，下调基因组GFAP、Tujl的表达最低，差异有统计学意义(P<0．05)。结论：miRNA1et．7f与大鼠脑发育相关，下调miRNAlet-7f的表达，促进NSCs增殖，抑制NSCs分化，而上调miRNAlet一7f的表达则抑制NSCs增殖，促进NSCs分化，miRNA】战-7f参与调控大鼠NSC

7、s分化过程，有促进分化的作用。关键词：miRNAlet．7f．慢病毒；神经干细胞；分化分类号：R72IIIInvolvementofMiRNAlet一7fintheRegulationofNeuralABSTRACTStemCellsDif托rentiationinRatsObjective：Inrecentyears，1．esearcheshaveshownmatt11emiRNAlet一7expressionincreasedinmeprocessofneuralstemceUsdif诧rentiation，promptingt11atmiRNAIe

8、t-7familypanicipateinregulationofneurals