mirna-101a对山羊骨骼肌卫星细胞增殖与分化调控作用研究

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1、？？？＇２７／６３６３挙号Ｓ２０１２３１１１分樂耳Ｓ８．１，．，？？１Ｉ■四川巧化大学硕ｄｒ学位论义ｍ－ｉＲＮＡｌＯｌａ对山羊骨駱肌卫星细胞增殖与分化调控作用硏究李丹丹ｒ指导老师张红平教巧学科专业动物遗传育种与巧殖研究方向分子遗传与山羊育种．２０１５年６月ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＭ过ｓｔｅｒＤｅｒｅｅＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｇ－ｎｏａｋｅＳｔｕｄｏｎｔｈｅｒｅｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｉＲＮＡｌＯｌａｉｔｓｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅ

2、ｙｇｇｓａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＬｉＤａｎｄａｎＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰｒｏｆ．ＺｈａｎＨｏｎｉｎｇｇｐｇＡｎｉｍａｌＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＧｏａｔＢｒｅｅｄｉｎｇＣｈｅｎｄｕＳｉｃｈｕａｎＣｈｉｎａｇ，，？Ｊｕｎｅ２０１５，论文指导小组成员李利（教授）王林杰（副研究员）仲涛（副研究员）０１１ＮＺ００９９－３６１４ＺＣ０８２８本论文由四川省科技支撑计划口，）资助在《四川农业大

3、学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室，，完成论文独创性声明本人郑重声明；所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它一教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名；抑年《月。曰／４４４关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，ｇｐ；学校有权保留并向国家有关部口或机构送

4、交论文的复印件和电子版，允许论文被查阔和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。论文不保密。□本论文保密，在年解密后适用本授权。＿＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）研究生签名：诗令年《月。曰書／导师签名：年月知日摘要ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）可Ｗ参与调控胚胎早期发育，细胞的增殖、分化和调亡，ｍｉＲＮＡ肿瘤发生及脂类代谢等许多复杂的生物过程，且在生物体内的表达具有时空－－特异性。已有研究表明ｍｉＲＮＡｌＯｌａ（ｍｉＲｌＯｌａ）参与Ｔ细胞的增殖、

5、分化过程的调－ｉＲｌＯｌ。控，但关于ｍａ对骨骼肌卫星细胞增殖与分化的调控机制尚不清楚本研究扩－－增了山羊ｍｉＲｌＯｌａ的前体及侧冀序列，分析了ｍｉＲｌＯｌａ的組织表达及其对骨骼肌卫星细胞（ＳＭＳＣ）增殖、分化的影响。利用双巧光素酶报告基因检测系统验证了肌肉－ｍｉＲｍ－分化抑制基因怎２说与ｌＯｌａ结合的鞭位点，并检测了过表达或抑制ｉＲｌＯｌａ对■ｍ－祀基因￡２片２ｍＲＮＡ表达水平的影响，初步揭示了ｉＲｌＯｌａ可能通过抑制祀基因的。蛋白表达调控骨骼肌发育的分子机制主要结果如下；１－－．山羊ｍｉＲ１０１ａ的前体及侧翼序列４４８ｂ成熟ｍｉ民１０１ａｐ，且在不

6、同物种中序ＲＮＡｆｏ－ｃ列窩度保守ｌｄ软件在线分析表明山羊ｍｉＲｌＯｌａ前体符合ｍｉｒｏＲＮＡ结，通过－民－构特征。半定量ＰＣＲ和巧光定量ＰＣＲ（ＲＴｑＰＣ）结果显示ｍｉＲｌＯｌａ在臂Ｈ头肌、背最长肌、半膜肌和腰大肌等肌肉组织中的表达量离于也、巧、脾、肺和肾等其他５个内脏组织。２－．ＲＴｑＰＣ民检测结果显示户０ｘ７ｍＲＮＡ在体外培养的ＳＭＳＣ増殖阶段表达量离，分化过程中表法量显著下降（戶＜０．０５）；Ｍｙｏ凸在増殖及分化初期表达量高；ＭｙｏＧ在分化敲合的第Ｈ天表达量最高；而Ｍｙ／化：在分化誕合过程中表达量逐渐升高。－ＲＴ－ＰＣ民－ｑ检测ｍｉＲｌＯ

7、ｌａ在ＳＭＳＣ分化０ｄ、１ｄ、３ｄ、５ｄ、７ｄ的表达量，发现ｍｉＲｌＯｌａ在ＳＭＳＣ分化过程中表达量随着分化时间的延长显著増加（戶＜０．０５）。３－．过表达或抑制ｍｉＲｌＯｌａ后诱导ＳＭＳＣ分化４８ｈ，巧光定量ＰＣ民检测肌肉标７－志基因戶０ｘ、缔０公、蛛ｏＧ、ＭｙＷＣｍＲＮＡ的表达变化，结果显示：过表达ｍｉＲｌＯｌａ后，与对照组相比ＭｙｏＧ和Ｍｙ／７Ｃ基因表达量显著提离（戶＜０．０１），戶０ｘ７和ＭｙｏＯ