laminin和fibronectin对胰腺祖细胞增殖及分化的调控研究

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1、万方数据学校代码：10225学号：S13164学位论文Laminin和Fibronectin对胰腺祖细胞增殖及分化指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：的调控研究冯锐成滕春波教授硕士2013．4东北林业大学学科专业：发育生物学论文答辩日期：授予学位日期：答辩委员会主席：论文评阅人：未必栉素大学万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S13164DissertationfortheDegreeofMasterRegualtionoflamininandfibronectinontheproliferatio

2、nanddifferentiationofpancreasprogenitorcellsCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExaminati011"University：fengruichengPro￡TengChunboMasterDevelopmentalBiologyNortheastForestry万方数据摘要糖尿病是一类常见的代谢疾病，主要包括I型糖尿病和II型糖尿病。I型糖尿病是由于胰腺B细胞自身免疫损伤造

3、成胰岛素分泌不足，患者需要注射外源胰岛素维持血糖在正常水平。胰岛移植是治疗I型糖尿病的一种有效方法，但是由于供体不足，限制了该方法的推广使用。因此，我们把目光投向利用胰腺干细胞治疗糖尿病。发育中的胰腺需要一个微环境来调控祖细胞的自我更新和命运，而这种微环境包括相邻的细胞、溶解的因子和细胞外基质；其中细胞外基质不仅提提供了力学上的支持，同时对于细胞的粘附、迁移、延展、增殖、分化和功能都有调控作用。细胞外基质是一种典型的大分子糖蛋白混合物，主要包括纤连蛋白(Fibronectin)、层粘连蛋白(Laminin)、胶原和蛋白聚糖类。细胞外基质作为配体只有和细胞膜

4、表面的受体结合后，才能将细胞外的信号传到细胞内。整合素是细胞外基质的一类重要受体，是跨膜的异源二聚体，由0L、B两种亚基组成，在结构上可以分为胞外区、胞内区和跨膜区。整合素和细胞外基质在脊椎动物相对保守，到目前为止，18种0【和8种D亚基被发现，并形成24种不同的整合素受体。细胞外基质与相应整合素受体胞外区结合后，激活胞内区和下游的信号原件，并激活相应的信号通路。通常认为细胞外基质和整合素受体主要通过P13K．Aktan／或ERK信号通路来调控细胞的增殖、分化等行为。Laminin和Fibronectin是胰腺中细胞外基质的主要组成部分，在胚胎胰腺发育的早

5、期决定细胞形态发生、迁移、分化和增殖。在本实验中我们分别用Laminin和Fibronectin包被培养胰腺祖细胞，CCK．8和Ki67免疫荧光染色检测发现，在增殖培养条件和非增殖培养条件下，Laminin和Fibronectin都能促进胰腺祖细胞增殖。Westernblot检测经Laminin或Fibronectin包被处理后培养的细胞，Akt、ERK磷酸化水平较对照组BSA升高；分别使用P13K．Akt抑制剂LY294002，ERK抑制剂PD98059或U0126处理Laminin或Fibronectin包被的细胞，则LY294002能显著抑制Lami

6、nin或Fibronectin对胰腺祖细胞的促增殖作用，而PD98059的抑增殖作用不明显，U0126则完全没有抑制作用，说明Laminin和Fibronectin对胰腺祖细胞的促增殖作用主要通过P13K．Akt信号通路。为了探明Laminin和Fibronectin在胰腺祖细胞表面的整合素受体，实时定量RT．PCR检测了Laminin或Fibronectin包被后整合素不同亚基的表达变化。结果表明，在胰腺祖细胞中整合素Dl的表达量最高；当用p1抗体阻断时，Laminin包被对胰腺祖细胞的促增殖作用完全被抑制，Fibronectin包被对胰腺祖细胞的促增殖

7、作用也大大降低，说明整合素Dl在细胞外基质Laminin或Fibronectin调控胰腺祖细胞的增殖过程中为细胞表面受体的主要组成部分。为了探索Laminin或Fibronectin包被对胰腺祖细胞增殖的基因表达变化调节，我们通过RT．PCR和实时定量RT．PCR检测了细胞周期相关基因，祖细胞标志分子，内分泌分化分子，外分泌分化分子的表达情况。结果表明，Laminin或Fibronectin包被可以促进细胞周期蛋白cyclinD2，cyclinD3，CDK6，CDK2万方数据摘要等表达上调，表明Laminin或Fibronectin通过促进细胞周期的进行促

8、进细胞增殖发生；而祖细胞标志分子，内分泌分化分子，外分泌分化分子的