农杆菌介导BtCry1Ac、NTHK1双价基因转化烟草植株的研究-论文.pdf

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1、河南农业科学，2014，43(7)：3l_37JournalofHenanAgriculturalSciences农杆菌介导BtCrylAc、NTHKI双价基因转化烟草植株的研究杜沙沙，张旭，王进茂，董研，杨敏生(河北农业大学，河北保定071001)摘要：为探讨多基因植物转化载体p096899中外源基因BtCrylAc和NTHK1在转基因植株中的表达情况，通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化野生烟草，经卡那霉素筛选，初步获得了10株转基因烟草植株。经PCR鉴定，证明目的基因已被整合到烟草基因组中。利用荧光定量PCR和

2、EIISA分析目的基因在转录水平和翻译水平的表达量，并对转基因烟草株系进行了抗虫试验和耐盐性试验。结果表明，目的基因在转录水平和翻译水平分别得到表达，但表达量存在差异，其中2号转基因株系毒蛋白表达量最高，其含量达可溶性总蛋白的0．0285；饲虫试验中，部分转基因烟草株系对斜纹夜蛾的毒杀作用明显高于未转化烟草，其中2号转基因株系的抗虫性最高，饲喂第6天斜纹夜蛾幼虫死亡率达到75．56，与Bt毒蛋白表达量相一致；在盐胁迫下，转基因烟草的叶片生长状况均好于对照(非转基因)烟草的生长。证明BtCrylAc基因和NTHK】基

3、因的转入在一定程度上提高了烟草的抗虫性和耐盐能力。关键词：烟草；BtCryl-Ac基因；NTHK1基因；抗虫性；耐盐性中图分类号：S572Q785文献标志码：A文章编号：1004—3268(2014)07～0031—07TobaccoTransformationwithBivalentGeneBtCrylAcandNTHK1MediatedbyAgrobacteriumDUSha—sha，ZHANGXu，WANGJin—mao，DONGYan，YANGMin—sheng(AgriculturalUniversity

4、ofHebei，Baoding071001，China)Abstract：TorevealtheexpressionofexogenousgenesBtCrylAcandNTHK1ofplanttransformationvectorp096899harboringmulti—genesintransgenicplants，thewildtobaccowastransformedbyAgrobacterium—mediatedleardisctransformationmethod．Tenstrainsoftran

5、sgenictobaccowereinitiallyscreenedoutbykanamycin．Then，identifiedbyPCR，thetargetgeneswereintegratedintotobaccogenome．Expressionoftargetgenesintranscriptionandproteinlevelswereanalyzedbyreal—timePCRandEIISA，andthestrainsoftransgenictobaccowerealsotestedforinsect

6、—resistanceandsalt—resistance，Theresultsshowedthatthetargetgenesexpressedinthetranscriptionandproteinlevels，respectively，andthereexistedanexpressionamountdifferenceamongthestrains．Thetoxicproteinamountofthe2thstrainwasthehighest，whichaccountedfor0．0285％oftheIe

7、aftotaIsolubleproteins．ResultoffeedinginsectexperimentillustratedthattoxiceffectexertedbysomeoftransgenictobaccostrainsonSpodopteralitura收稿日期：2014—01—2O基金项目：国家高技术研究发展计划“863”计划项目(2011AA100201)；国家自然科学基金项目(31370663)作者简介：杜沙沙(1987一)，女，河北安国人，在读硕士研究生，研究方向：植物基因工程育种。E—

8、mail：wqhdushasha@sina．corn*通讯作者：王进茂(1969一)，男，河北深县人，教授，博士，主要从事植物生物技术与抗逆性研究。E—mail：swjs224@aliyun．corn32河南农业科学第43卷wasobviouslystrongerthanthatofuntransformedstrains(CK)．The2thstrainw