农杆菌介导的黄瓜活体植株转基因方法研究-论文.pdf

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1、分子植物育种，2014年，第12卷，第4期，第796—801页MolecularPlantBreeding，2014，Vo1．12，No．4，796—801技术主题TechnologyFeature农杆菌介导的黄瓜活体植株转基因方法研究魏爱民杜胜利韩毅科刘楠天津科润黄瓜研究所，天津，300192通讯作者，dshengli@aliyun．com摘要为建立简单高效的黄瓜转基因技术体系，本研究以携带有抗除草剂Bar基因的农杆菌工程菌浸泡处理开花期黄瓜嫩梢，进行活体植株转基因方法研究。研究结果表明最佳转化体系为：表面活性剂silwet一77适宜浓度0．01％～0．05％；菌液浸泡最佳位

2、置为顶部以下10cm嫩梢，最适子房发育时期为开花前5-12d子房；农杆菌菌株EHA105浸染效果优于LBA4404；3次重复浸泡处理有利于提高转化频率。黄瓜苗期除草剂抗性筛选适宜浓度为17％草胺膦1100倍稀释液。研究获得除草剂抗性植株1320株，PCR阳性植株36株，其中30株经Southern斑点杂交后有阳性信号，最高转化效率为9．5％。关键词黄瓜，转基因，活体植株，抗除草剂StudyonTransformationTechnologyThroughAgrobacteriumtumefaciensMediationinLivingCucumberPlantsWeiAimin

3、DuShengliHanYikeLiuNanTianjinKernelCucumberResearchInstitute，Tianjin，300192Correspondingauthor，dshengli@aliyun．comDOI：10．13271~．mpb．012．000796AbstractToestablishasimpleandeficientcucumbertransforillationmethod，anewtransformationmethodthroughsoakingcucumbershootsintosolutionofAgrobacteriumtum

4、eq％iensstrainwithBargenewasstudied．Theresultsindicatedthattheoptimalsurfactantsilwet一77concentrationwas0．01％~0．05％．theoptimalsoakingpositionwastop10cmlongshoots，theoptimalovarystagefortransformationwas5-12dbeforeanthesis．AgrobacteriumstrainEHA105wasbetterthanLBA4404intransformationeficiency，

5、3timesofrepeatsoakingtreatmentwasbeneficialfortransformation．Theoptimalglyphosateconcentrationforherbicideresistantplantsscreeningwas1100timesdilutionofthe17％origina1．Among1320herbicideresistantplants，36werePCRpositive．withinwhich30plantswereSouthernblottingpositive．Thehighesttransformatione

6、ficiencywas9．5％．KeywordsCucumber(CucumisSativusL．)，Transformation，Livingplants，Herbicideresistant黄瓜CucumisSativusL．)是中国重要的蔬菜作植株，由于步骤繁琐，基因型差异明显，转化率较低，物之一，目前其品种选育仍以常规育种为主，由于现且组培转化过程易产生体细胞变异，常使转基因植有种质资源缺乏抗病、抗虫、抗逆等优异材料，阻碍株在育种中无法应用。此外，研究人员通过开展电击了重大突破性新品种选育。通过基因工程方法导入法(徐华强等，1991)、基因枪法(Kodamaeta1．，

7、1993)、优异外源基因，创造黄瓜育种新种质，将成为提升我花粉管通道法(李远新等，2000)等黄瓜转基因研究，国黄瓜品种选育水平的重要手段。可避开组织培养过程，操作较简单，可直接获得转化黄瓜的遗传转化方法较多采用农杆菌介导的浸种子，但其转化率相对较低，转基因植株后代遗传情染子叶或子叶节，通过离体体细胞再生，获得转基因况较为复杂。收稿日期：2014—01—28接受日期：2014-03-15网络出版日期：2014—03—26URL-http：／／www．biopublisher．cn／index