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《农杆菌介导的木薯转基因研究初报.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第27卷第3期广西农业生物科学2008年9月Vol127,No13JournalofGuangxiAgric1andBiol1ScienceSept1,2008文章编号:100823464(2008)0320218205农杆菌介导的木薯转基因研究初报12121覃艳,何勇强,农友业,姜伯乐,吴子恺(1广西大学农学院,广西南宁530005;2广西大学生命科学与技术学院,广西南宁530005)摘要:将米曲霉植酸酶基因phyA克隆于植物表达载体pBI121的CaMV35S启动子(P35S)下游,构建了含有P35S2phyA2TNOS表达盒的重组质粒pBI2phyA,并用电脉冲法将其导入大肠杆菌
2、中。通过三亲接合将pBI2phyA质粒由大肠杆菌导入根癌农杆菌LBA4404菌株,获得带有phyA基因的根癌农杆菌工程菌株LBA4404/pBI2phyA。用LBA4404/pBI2phyA转化木薯外植体652个,在含100mg/L卡那霉素和250mg/L氨苄青霉素的MS分化培养基上诱导分化芽,获得24株抗卡那霉素转化苗。以转化苗和未转化植株的总DNA为模板,用phyA基因的同源序列为引物,进行聚合酶链式反应(PCR),结果表明9株转化苗的PCR结果为阳性,初步证明目的基因phyA已经转入木薯中。关键词:植酸酶基因;根癌农杆菌;木薯;转基因中图分类号:Q94312文献标识码:APrel
3、iminaryreportongenetictransformationofcassavamediatedbyAgrobacteriumtumefaciens12121QINYan,HEYong2qiang,NONGYou2ye,JIANGBo2le,WUZi2kai(1CollegeofAgriculture,GuangxiUniversity,Nanning530005,China;2CollegeofLifeScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530005,China)Abstract:TheAspergillusoryza
4、ephytasegenephyAwasclonedintothesiteofdownstreamtheCaMV35Spromoter(P35S)oftheplantexpressionvectorpBI121,generatingarecombinantplasmidpBI2phyAcontainingtheexpressioncassetteP35S2phyA2TNOS1pBI2phyAwasthenintroducedintotheEscherichiacolicellsbyelectroporation1ThegeneticengineeringAgrobacteriumtume
5、faciensstrainLBA4404/pBI2phyAwasconstructedbyintroducingtheplasmidpBI2phyALBA4404fromE1coli/pBI2phyAviatriparentalconjugation1652explantsofcassava(ManihotesculentaCrantz)wereco2culturedwithLBA4404/pBI2phyA1RegeneratedshootswereselectedoutonMSmediumsupplementedwith100mg/Lkanamycinand250mg/Lampici
6、lin124putativetransgenicplantswereobtained1ThetotalgenomicDNAsoftheseregeneratedplantsanduntransformedplantsweredetectedwithpolymerasechainreaction(PCR)1Theresultindicatedthat9oftheseregeneratedplantscontainedphyAgene1Keywords:phytasegene;Agrobacteriumtumefaciens;cassava;genetictransformation木薯(
7、ManihotesculentaCrantz)是热带地区重要的粮食作物之一,在我国主要分布于广西、广收稿日期:2007211223;修回日期:2007212203。基金项目:广西科学研究与技术开发计划(桂科基0009017)。作者简介:覃艳(19792),女(壮族),广西南宁人,硕士,现在广西玉林市玉州区农业局工作;E2mail:qinyan222@1631com。通讯作者:何勇强,教授,博士生导师;E2mail:yqhe@gxu1edu1cn
