猪骨基多孔碳固定化酶的研究-论文.pdf

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1、第34卷第2期明胶科学与技术V01．34．No．22014年6月TheScienceandTechnologyofGelatinJun．2014．猪骨基多孔碳固定化酶的研究阮如玉’魏坤锐’王昱琳孙1．北京化工大学理学院，北京，1000292．北京化工大学材料科学与工程学院，北京，100029摘要：本文以猪骨基多孔碳为载体，采用明胶难以在工业中得到更为广泛的应用J。包埋与戊二醛交联结合的方法，制备固定化过如今，固定化酶技术已成为酶工程研究的氧化氢酶，并对固定化酶制备条件的优化，酶重点和热点j。研究探索新的酶固定化

2、技术、作用最适条件及其稳定性进行研究。结果表尽可能提高固定化酶载酶量与酶活性、增加固明：以猪骨基多孔碳为载体吸附2h、1％明胶定化酶的操作稳定性和贮存稳定性、并努力降包埋、1％戊二醛交联过氧化氢酶制备的固定低成本成为了固定化酶研究领域的主要研究化酶，在最适的缓冲液浓度、溶液pH和体系温内容。度下，虽然催化效率有所下降，但其贮存稳定猪骨基多孔碳具有比表面积高，吸附能力性和操作稳定性都有所增加，重复使用8次强等特点，十分有利于酶的固定化。明胶是后，活力仍保持在初始活力的90％以上。这一种天然高分子材料，由动物的骨、

3、生皮、肌对于过氧化氢酶进一步在食品工业和纺织工腱、膜等组织中所含的胶原水解制得。加之明业的推广可能有潜在的应用价值。胶提取于生物组织，同时具有无抗原性、良好的生物相容性和可降解性，为其在固定化酶方关键词：固定化酶；多孔碳；明胶；过氧化氢酶面的应用提供了良好的性能基础。。。戊二醛是一种具有双功能基团的交联剂，同时提高1前言固定化酶稳定性和耐压强度。本实验中充分过氧化氢酶是动物组织中一种很常见的利用了比表面积高、吸附能力强的天然猪骨基酶，可将过氧化氢催化分解成氧气和水J。过多孔碳作为固定化酶的载体，与具有适宜生物氧

4、化氢酶在各个工业领域的应用很广泛，在食相容性的明胶包埋固定化酶的技术相结合，并品和乳制品工业中常被用来除去奶酪制造前采用戊二醛试剂交联制备了性能优良的固定进行牛奶杀菌消毒后残余的过氧化氢，在烘烤化过氧化氢酶。食品过程中利用过氧化氢酶分解过氧化氢产2实验部分生的氧气起到疏松作用；在造纸工业中，用过2．1实验原料及试剂氧化氢漂白代替传统的含氯漂白方法，用过氧实验原料及试剂见下表1。化氢酶去除多余的过氧化氢；在环保方面，用2。2实验仪器及设备过氧化氢和过氧化氢酶处理工业废水和生物主要实验仪器及设备见下表2。过滤器J。

5、但游离的过氧化氢酶有不稳定、2．3实验方法容易变性失活、提取难和成本高等缺点，使其2．3．1猪骨基多孔碳固定化载酶量的测定}E-mM1：wy120083@163．com第34卷第2期阮如玉等：猪骨基多孔碳固定化酶的研究·85·其他试剂均为国产分析纯产品表2主要实验仪器及设备名称生产厂家FA2004B型分析天平上海精密科学仪器有限公司LGJ一12冷冻干燥箱北京机源华兴科技发展有限公司UV2000紫外分光光度计美国UNICOSHA．B(A)双功能恒温水浴振荡器金坛市科析仪器有限公司101-OAB型电热鼓风干燥箱天津

6、市泰斯特仪器有限公司PHS-3CpH计上海精科电子有限公司恒温水浴锅上海申光仪器仪表有限公司移液枪大龙医疗设备(上海)有限公司考马斯亮蓝G一250法测定蛋白质含量，需馏水定容到1000mL。此溶液在常温下可放置取加入猪骨基多孔碳固定化的原酶液的上清一个月。液1mL，加入5mL考马斯亮蓝G一250染色，在标准曲线制作：取6支lOmL干净的试管，595nm波长下比色，在标准曲线中读取酶量，分别加入配好的浓度为0，0．2，0．4，0．6，0．8，可计算出猪骨基多孔碳固定化酶的载酶量。1．0mg／mL的蛋白液。每个试管

7、中取50，用2．3．2蛋白质浓度与吸光度关系的标准曲线5mL考马斯亮蓝染色2min，再经蒸馏水稀释2倍制定后，用lcm光经的比色杯在595nm波长下比色，牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取记录测定的吸光度OD595nm，并做标准曲线。100rag牛血清白蛋白，溶于100mL0．1mol／L2．3．3固定化酶的制作方法PBS中，即为1000~g／mL的原液。配制一定量lmg／mL的酶液，按照10rag蛋白试剂考马斯亮蓝G-250的配制：称取碳大约对应4mL酶液的比例称取一定量的猪100mg考马斯亮蓝G一250，

8、溶于50mL90％乙醇骨基多孔碳，将碳加入酶液中置于4℃条件下中，加入85％(w／V)浓磷酸lO0mL，最后用蒸吸附2h，之后吸出上清液，将明胶溶于磷酸缓·86·明胶科学与技术2014年6月冲溶液中在室温下溶胀，然后于40—60℃环境ce表示反应后过氧化氢溶液的剩余浓度(M)；中溶解几分钟，向初步制取的固定化酶中加入t表示反应时间(min)；m表示所用固定化酶的一定浓度的明胶溶液10m