多孔壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶的研究

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1、万方数据￡孓≥～、筋S科CIENC技EAND～一滞——_I食品只发与柚赫qlFoDOTE洲D坤喀荐一鼙擎——一EiZ叩兀JX—司朋¨叽多孔壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶的研究钟方旭1。张弦2，李春美2(1．武汉工业学院生物与制药工程系，武汉430023；2．华中农业大学食品科技学院，武汉430073)摘要：采用自制的多孔壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶，以酶活回收率为参考指标，分别对酶浓度、酶与栽体用量比、戊二醛浓度、吸附时间、交联时间、BSA浓度等进行了单因素试验，考察了其对碱性蛋白酶固定化的影响。确定了较好的

2、固定化碱性蛋白酶的工艺条件。结果表明，碱性蛋白酶固定化的最佳工艺条件为：酶与栽体用量比315U／s、酶浓度45mg／mL、固定化温度4℃、固定化pH7．2、吸附时间48h、交联时间8h、戊二醛浓度为l％、BSA浓度4．5mgCmL，此时RRA达到65．46％．固定化碱性蛋白酶也具有较好的理化性质。关键词：壳聚糖；多孔微球；碱性蛋白酶；固定化中图分类号：'IS201．2文献标志码：A文章编号：1005—9989(2008)03—0049—04Studyonimmobilizationofalkalinep

3、roteinaseonporouschitosanmicrospheresZHONGFang-xul,ZHANGXian2,LIChun-meP(1．DepartmentofBiologicalandPharmaceuticalEngineering，WuhanPolytechnicUniversity，Wuhan430023；2．CollegeofFoodScienceandTechnology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430073)Abstract：A

4、lkalineproteasewasimmobilizedbyusingporouschitosanmicrosphereswhichwerepreparedbyourselves，theproportionofenzymetocamers，theconcentrationsofalkalineprotease，glutaraldehydeandBSA。pH，temperature。absorptionandcrosslinkingtimewerestudiedbyusingrecyclingrateo

5、factivityasindexandthebettermethodwasfound．ThetestindicatedthattheoptimumtechnicswereasfoIlows：theproportionofenzymetocarderswas315u／g，theconcentrationofalkalineprotease，glutaraldehydeandBSAwere45mg／mL，1％，4．5mg／mLrespectively，pHwas72，temperaturewas4℃。abs

6、orptionandcrosslinkingtimewere48hoursand8hours,therecyclingrateofactivityreached65．46％。thealkalineproteasehasgoodphy’sicalandchemicalproperties．Keywords：chitosan；pdrousmicrospheres；alkalineprotease；immobUization酶作为一种天然的高分子催化剂。因其具有极高的选择性、反应条件温和、无污染等诸多优点，使

7、其在食品加工、医药等产业中有着极为广阔的应用前景。然而，游离酶的不稳定和容易变性等缺点，限制了其在工业化生产中的应用，此外，从反应体系中分离和提纯酶也增加了其作为催化剂的成本，收稿日期：200r7_08-08基金项目：湖北省自然科学基金项一目(2005ABA090)。作者简介：钟方旭(1972-_)，男，博士，副教授，主要研究方向为食品生物技术。万方数据食品开发与相辅■固定化酶技术正是在此条件下得以提出和发展的flJ。壳聚糖具有廉价易得、易改性、天然无毒等优良性能，目前已成功实现了多种酶的固定化，如葡萄

8、糖氧化酶圆、青霉酰化酶[31、天门冬酰胺酶嗍、木瓜蛋白酶【，-61等。但是关于多孑L壳聚糖微球固定化碱性蛋白酶(AlkalineProteinase，AP)的研究较少。随着动物水解蛋白的禁用及植物水解蛋白应用的不断广泛，如何对植物蛋白进行改性已成为研究热点171，尤其是酶法改性研究更是受到极大关注。但是游离酶水解谷朊粉由于存在产物分离纯化困难、生产成本高等缺点，使得其应用受到限制。本课题以多孔壳聚糖微球为载体．研究并确立了制备具有较高酶活回