建立白色念珠菌蛋白指纹库的研究-论文.pdf

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1、国际检验医学杂志2014年5月第35卷第1O期IntJIbMed，May2014．Vo1．35，No．10·基础实验研究论著·建立白色念珠菌蛋白指纹库的研究杨永长，喻华，刘华，肖代雯，黄文芳△(四川省医学科学院／四川省人民医院检验科，四川成都610072)摘要：目的探讨白色念珠菌蛋白指纹库的建立，为白色念珠菌感染快速诊断奠定基础。方法收集96株临床分离的白色念珠茵，提取DNA，采用聚合酶链反应(PCR)扩增其ITS1—5．8S—ITS2基因片段，利用限制性内切酶对其进行鉴定。应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SEL

2、DI—T0F—MS)仪检测念珠菌蛋白指纹，CiphergenProteinChip软件自动采集数据，筛选稳定表达蛋白峰建立白色念珠菌蛋白指纹库，运用经准确鉴定的念珠菌对建立的蛋白指纹库进行验证。结果限制性片段长度多态性分析证实临床分离的所有菌株均为白色念珠茵。SEIDI-TOF～MS芯片能捕获15个蛋白峰，其中5个蛋白峰在所有白色念珠茵中均稳定表达，利用相似性分析软件建立白色念珠菌蛋白指纹库，白色念珠茵蛋白指纹与建立数据库的相似性大于95，而其他种类念珠菌蛋白指纹与数据库的相似性均小于5O。结论白色念珠茵蛋白指纹库的建

3、立为快速诊断白色念珠菌感染提供了理论依据。关键词：念殊茵，白色；肽谱；光谱法。质量，基质辅助激光解吸电离DOI：10．3969／j．issn．1673—4130．2O14．10．004文献标识码：A文章编号：1673—4130(2014)l0—1240—03AstudyonestablishmentofpeptidemappingdatabaseofCandidaalbicansYangYongchang，YuHua，LiuHua，XiaoDaiwen，HuangWenfang(DepartmentofClinical

4、Laboratory，SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeopleSHospitaZ，Chengdu，Sichuan610072，China)Abstract：ObjectiveToexploretheestablishmentofpeptidemappingdatabaseofCandidaalbicans，layingthefoundationforrapiddiagnosisofCandidaalbicansinfection．Methods96C

5、andidaalbicanswerecollectedclinically，anditsDNAwasextracted．Polymerasechainreaction(PCR)wasusedtoamplifytheITS1—5．8S-ITS2genefragmentsandrestrictionendonucIeaseswereadoptedtoidentifythem．Surfaceenhanced1aserdesorptionionizationtimeofflight—massspectrometry(SEIDI

6、—T()F—MS)instrumentwasappliedtodetecttheCandidaalbicanspeptidemapping，andCiphergenProteinChipsoftwarewasusedtocollectdataautomati—cally．TheestablishedpeptidemappingdatabasewasverifiedbyconfirmedCandida．ResultsAccordingtorestrictionfragmentlengthpolymorphismanaly

7、sis，96strainswereconfirmedasCandidaalbicans．15peptidepeakswerecapturedbySEIDI—TOF—MSchips．Fivepeptidepeaksofthemwithstableexpressionwerescreenedout，andthesimilarityanalysissoftwarewasusedtoestab—lishpeptidemappingdatabaseofCandidaalbicans．Morethan95ofsimilarityw

8、asfoundbetweenpeptidemappingofCandidaalbicansandestablisheddatabase，whilelessthan50wasfoundbetweenpeptidemappingofotherCandidaspeciesanddatabase．ConclusionTheestablis