甘露聚糖肽 HPLC法指纹图谱的建立-论文.pdf

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1、动物医学进展，2014，35(3)：36—40ProgressinVeterinaryMedicine甘露聚糖肽HPLC法指纹图谱的建立毛瑞娟，毛跟年，李楠，邵静可(陕西科技大学，陕西西安710021)摘要：采用HPIC法建立甘露聚糖肽口服液中氨基酸指纹图谱。色谱条件为DiamonsilC18柱(250mm×4．6mm，5Mm)，流动相：A相为乙腈一水(4：1)，B相为0．1mol／L醋酸钠一乙腈(93：7，pH6．4)；梯度洗脱；流速1．0mL／min；检测波长254nm。以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂，对来自3个厂家共10

2、批次产品进行色谱分析，建立甘露聚糖肽口服液指纹图谱。精密度、重现性、稳定性试验RSD均不大于3。未水解甘露聚糖肽口服液指纹图谱共有11个峰，水解后指纹图谱共有11个峰，样品相似度均在0．90以上。研究结果表明，本方法稳定、准确，可为控制甘露聚糖肽口服液的质量提供参考。关键词：甘露聚糖肽口服液；高效液相色谱；衍生化；指纹图谱中图分类号：R914文献标识码：A文章编号：1007—5038(2014)03003605甘露聚糖肽又名多抗甲素，是我国首创的一种(分析纯)；甘露聚糖肽口服液：1批次～4批次样品新型免疫增强剂，是从健康人

3、口腔分离的一株a一溶批号分别为130105、130116、130117、130108，成都血性链球菌(a—hemolyticStreptococcus)33号菌株利尔药业有限公司产品；5批次～7批次样品批号分经深层培养、发酵提取而得到的一种具有免疫活性别为121001、121004、121005，西安交大药业有限公和抗肿瘤作用的多糖类物质]。甘露聚糖肽具有提司产品；8批次～1O批次样品批号分别为121104、高免疫功能、提升白细胞、抑瘤等作用，主要用于免121105、121107，上海全宇生物科技内乡制药有限公疫增强剂及抗

4、瘤常规治疗的辅助剂¨2]。现有文献司产品。报道甘露聚糖肽产品的检验标准中只包含性状、鉴1．1．2主要仪器Waters高效液相色谱仪，包括别、检查、甘露糖含量测定项，客观而言，现行标准难1525型二元梯度色谱泵、2487型紫外检测器、Em—以全面反映产品的内在质量。power色谱工作站，美国Waters公司产品；K250DE型超声波清洗器，江苏省昆山市超声仪器有甘露聚糖肽中除了含有大量甘露糖以外，氨基限公司产品；ALC一210．2型电子天平，北京赛多利斯酸也是其主要药效成分，是反映该产品质量的关键仪器系统有限公司产品；DGG

5、一9070A型电热恒温鼓因素。氨基酸指纹图谱的建立有利于甘露聚糖肽风干燥箱，上海森信实验仪器有限公司产品；PHB一3及成品制剂的质量控制。而目前从氨基酸角度对甘笔式pH计，上海三信仪表厂产品；SK—l型快速混露聚糖肽口服液进行质量控制的相关报道，其产品匀器，金坛市杰瑞尔电器有限公司产品。来自同一厂家，不具概括性，且与本研究方法有所差1．2方法异。因此，为了全面地进行质量控制，本研究采用高1．2．1色谱条件DiamonsilC18色谱柱(250mm效液相衍生化法分析甘露聚糖肽口服液中氨基×4．6mm，5“m)；流动相：A相为

6、乙腈一水(4：1)，B酸⋯，分别对来自不同厂家共1O批次水解前后的相为0．1mol／L醋酸钠一乙腈(93：7，pH6．4)；梯度样品建立指纹图谱，可为有效控制甘露聚糖肽口服洗脱程序如下：0～11．0min，A0～7；11．0min液的质量提供参考。～13．9min，A7～12；13．9min～14．0rain，l材料与方法A12～15；l4．0rain29．0min，A15～34；1．1材料29．0min～30．0min，A34～100；30．0min～1．1．1原料与试剂乙腈(色谱纯)、超纯水；乙酸36．0min，A10

7、0；36．0rain40．0min，A100～钠、乙酸、异硫氰酸苯酯、三乙胺、正己烷、苯酚、盐酸0；40．0min～45．0min，A0。流速1．0收稿日期：2O13—1O一27基金项目：陕西省自然科学基金项目(2012JZ3OO2)作者简介：毛瑞娟(1988)，女，山西临汾人，硕士研究生，主要从事生物化工研究。*通讯作者毛瑞娟等：甘露聚糖肽HPLC法指纹图谱的建立37mL／min；检测波长254nm；柱温25℃。积相对标准偏差均小于3．0，保留时间相对标准1．2．2衍生化试剂的制备精密量取0．3mL异偏差均小于1．4，表

8、明精密度良好。硫氰酸苯酯置于25mL棕色量瓶中，采用乙腈定容2．1．2重现性试验精密量取同一批次样品5份，至刻度，摇匀，备用。按1．2．5方法制备成供试液，分别进样1OL记录1．2．3未水解样品的制备精密量取甘露聚糖肽色谱图。未水解供试液色谱图中各主要色谱峰保留口服液3mL置于25mL容量瓶中，用超纯水