刺参体腔液蛋白质双向电泳体系的建立及优化-论文.pdf

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1、中国摩亏c童提2014，30(14)：39—45ChineseAgriculturalScienceBulletin刺参体腔液蛋白质双向电泳体系的建立及优化梁学旺，田皴，湛矗矗，常亚青(大连海洋大学／农业部北方海洋增养殖重点实验室，辽宁大连116023)摘要：为了探索并建立刺参的体腔液蛋白双向电泳体系，实验对刺参体腔液的蛋白质制备方法、上样量、IPG胶条的pH选择及等电聚焦程序进行了优化，并利用银染法进行染色。结果表明：改进的TCA一丙酮沉淀法增加了提取的蛋白量和纯度；采用8．5cm，pH4～6．5的IPG胶条，45g蛋白上样量，等电聚焦先设250V电压，7mA电流，聚焦时间30min后，再

2、将电压升至1000v，聚焦时间3h，能有效提高双向电泳f2一DE)图谱中蛋白点的分离度和分辨率。本实验可用于筛选刺参差异表达蛋白以及后续的刺参蛋白质组学研究。关键词：刺参；体腔液；双向电泳中图分类号：F326．4文献标志码：A论文编号：2013．3218EstablishmentofTwo-dimensionalGelElectrophoresisf2一DE)forCoelomicFluidinAposachopusjaponicusLiangXuewang，TianYi，ZhanYaoyao，ChangYaqing(KeyLaboratoryofMariculture，Min~tryofA

3、griculture，DalianOceanUniversity，DalianLiaoning116023)Abstract：Inordertouse2一DEanalysisinthecoelomicfluidproteinsofApostichopusjaponicus．Theproteinextractionmethods，samplevolume，pHofIPGgelstripsandisoeleetricfocusingprogramswereoptimizedtoobtainbestresults．Theresultsshowedthattheproteinyieldandpuri

4、tywereincreasedbyimprovedTCA—acetoneprecipitationtreatment．Theresolutionandreproducibilityof2一DEprofilesweresignificantlyimprovedbyelecting8．5cm(pH4—6．5)IPGgelstrips，loadingthesample45gandseting250V，7mAisoelectricfocusingfor30minthen1000vfor3h．Theresultofferedanimportantreferenceinscreeningdifferen

5、tialexpressionproteinandproteomicsinApostichopusjaponicus．Keywords：Apostichopusjaponicus；coelomicfluid；proteintwo—dimensionalelectrophoresis(2-DE)0引言可避免地要受到各种疾病的困扰。养殖户往往由于不刺参(Apostichopusjaponicus)属于棘皮动物门能及时获得海参疾病信息，采取相应措施，从而延误问(Echinodermata)、海参纲(Holothurioidea)、刺参科题的解决甚至造成重大经济损失。因此，海参疾病诊(Stichopo

6、diade)、仿刺参属(Apostichopus)。海参纲是棘断的研究越来越多地受到了专家学者的关注口】。同时皮动物门中最有经济意义的一纲，而刺参又是海参纲由于海参缺少特异性免疫组织和器官，其对外界的免中营养价值和药用价值最高的种类u。近年来，海参疫作用主要依靠体腔细胞进行细胞免疫和体液免疫。通养殖所带来的经济效益和社会效益日益显现，极大地过提高海参自身免疫力抵御病害及外来微生物是海参促进了海参养殖业的发展。在海参养殖的过程中，不健康养殖有效的方法。研究海参体腔液有利于从细基金项目：国家自然科学基金项目“刺参盐度调控基因的筛选及功能验证”(41106128)；辽宁省高等学校青年学者成长支持计

7、划“盐度胁迫下刺参生理特性及分子调控机制研究”(LJQ2012064)；国家“863”计划项目“高值海珍品良种培育”(2012AA10A412)。第一作者简介：梁学旺，男，1988年出生，江苏连云港人，硕士，主要从事动物遗传研究。通信地址：116023大连海洋大学生命科学与技术学院，农业部北方海洋增养殖重点实验室，E—mail：842943816@qq．tom。通讯作者：田皴，女，1979年出生，内蒙古赤峰人