肺癌血清蛋白质双向电泳图谱的建立-论文.pdf

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1、堡壁型箜壁整生蔓!鲞箜塑：!!：：』垫壁!垫皇旦!垦竺口1401肺癌血清蛋白质双向电泳图谱的建立李雪华k。刘燕青谷彦军刘静1武警后勤学院附属医院病理科，天津市300162；2天津市职业与环境危害防制重点实验室摘要目的：建立肺癌血清蛋白质双向凝胶电泳(2一DE)图谱。方法：对肺癌血清蛋白质2-DE的IPG胶条选择、上样量、聚焦参数、样品缓冲液、沉淀处理等各方面进行调整、优化。结果：获得了稳定的肺癌血清蛋白质2-DE图谱。结论：已建立的肺癌血清蛋白质2-DE图谱，可以为进一步开展肺癌的血清蛋白质组学研究奠定基础。关键词肺癌血清蛋白质组学双向凝胶电泳中图分类号：R73

2、4．2文献标识码：A文章编号：1001—7585(2014)11—1401—03EstablishmentoftheMapofSerumProteinsforLungCancerbyTwo-dimensionalPolyacrylamideGelElectrophoresisLIXuehua。LIUYanqing，GUYanjun．eta1．DepartmentofPathology，A}}tliatedHospitalofLogisticsUniversi—tyofChinesePeople’ArmedPoliceForce，n口aty300162ABSTRA

3、CTObjective：Toestablishthemapofserumproteinsforlungcancerbytwo-dimensionalpolyacrylarnidegele—lectrophoresis(2-DE)．Methods：Variousconditionsofserumproteins2-DE，suchaschoiceofIPGstrips，quantityofloadingproteins，parametersofIEF，bufferofproteins，precipitationofsamples，wereadjustedandopt

4、imized．Results：Asteady2-DEmapofserumproteinsforlungcancerwasestablished．Conclusion：Ourestablished2-DEmapofserumproteinsforlungcancercanbeeffectivelyappliedinserumproteomicsoflungcancer．KEYWORDSLungcancer，Serumproteomics，Two-dimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis肺癌已成为当前世界各国常见的恶性肿

5、瘤之1．2．1血清收集：取研究对象肘正中静脉血3ml，一，预后很差，5年存活率仅为14[1]。蛋白质组学4℃放置50rain，1500r／min离心10rain，吸取血清，(proteomics)为肺癌的研究提供了新的思路和技术Bradford法测定血清蛋白浓度，分装，存于一8O℃冰平台。双向凝胶电泳(two-dimensionalpolyacryl-箱备用。amidegelelectrophoresis，2一DE)是蛋白质组学研究1．2．2双向凝胶电泳：2一DE方法主要参考文献[3]的核心技术，用于分离蛋白质[2]。固相pH梯度和仪器操作手册进行。以pH4～7

6、、17cmIPG胶条(immobilizedpHgradient，IPG)干胶条的出现使得为例。600btg蛋白质与上样缓冲液(7mol／L尿素，2一DE的重复性大大改善，尽管如此，稳定性和重复2mol／L硫脲，4CHAPS，50mmol／LDTT，性仍然是2-DE技术的主要问题。本研究利用2一2mmol／LTBP，0．2IEFbufferpH3～10，痕量溴DE技术分离肺癌血清蛋白质，建立稳定的肺癌血酚蓝)充分混合，总体积为400／A，上样，胶条被动重清蛋白质2-DE图谱，对2-DE的条件进行了各方面水化16h；等电聚焦电泳(IEF)条件为250Vlh、的调整

7、优化，为进一步的肺癌血清蛋白质组学研究500V1h、1000Vlh、5000V3h、10000V70000奠定基础。Vh；等电聚焦完毕，IPG胶条立即在平衡液A1材料与方法(6mol／L尿素、2SDS、PH8．8的0．05tool／L1．1材料和仪器肺癌血清标本取自武警后勤学Tris—HCL、2O甘油、2DTT)中平衡15min，再于院附属医院。IPG干胶条(pH3～10L、pH3～平衡液B(以2．5碘乙酰胺替换平衡液A中21ONL、PH4～7，17cm)、IEFbuffer(pH3～10)、三DTT)中平衡15rain。之后的垂直板SDS-PAGE丁基膦(Tr

8、ibutylphosph