‘四季蜜’龙眼花芽总蛋白质提取方法及双向电泳体系的优化-论文.pdf

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1、热带作物学报2014，35(6)：1095—1101ChineseJournalofTropicalCrops‘四季蜜’龙眼花芽总蛋白质提取方法及双向电泳体系的优化欧高政．-．陈清西1福建农林大学园艺学院．福建福州3500022福建农业职业技术学院．福建福I350119摘要利用TCA丙酮法、丙酮法、TCA酚抽提法和改良酚抽法等4种方法，提取‘四季蜜’龙眼花芽的总蛋白质，在蛋白产量、单SDS—PAGE和2-DE图谱等方面进行比较，并对IPG胶条种类、蛋白质上样量及等电聚焦条件等进行优化。毛果表明：采用改良酚抽法，选用24em、pH3～10的胶条，按120P-g上样，在适宜的等电聚焦条件

2、下．可获得背景清晰、重复性好、分辨率高的2一DE图谱．本研究为‘四季蜜’龙眼花芽蛋白质组学后续研究奠定了基础关键词‘四季蜜’龙眼：花芽：总蛋白；提取方法；双向电泳中图分类号$667．201文献标识码AMethodofTotalProteinIsolationfromFloralBudsofLongan(DimocarpuslonganLour．CvSijimi)andOptimizationofTwo-dimensionalElectr0ph0resisSystemOUGaozheng'_．CHENQingxi1Collegeofllorticulture，F~jianAgricul

3、tureandForestryUniversity,Fuzhou，阿ion350002，China2r~jianVocationalCollegeofAgriculture，Fuzhou，阿ian350119,ChinaAbstractThetotalproteinintheflorMbudsofDimocarpuslonganLour．CvSijimiwasextractedwithfourmethods，namelytrichloroaceticacid(TCA)一acetone，acetone，TCA／phenolandimprovedphenol，andcomparedbyp

4、roteinproduction，one-waySDS：PAGEand2-DE．Thesampleloadingquantity，thegelconcentrationandthekeyprocessofIEFwerealsooptimized．Theresultshowedthattheimprovedphenolextractionprotocolwasthebestmethodforfloralbuds．Andahighquality2一DEmapwithlowbackgroundwasobtainedusingthefollowingoptimizedprocedure：lo

5、ading120P,gproteinsampleon24cmIPGstripwithpH3-10．ThestudybuiltupagoodbasisforthefutureproteomicsresearchinD．1ongan(Lour．CvSijimi)．KeywordsDimocarpusIonganLour．CvSijimi；Floralbuds；Totalprotein；Extractionmethod；Two-dimensionalelectrophoresisdoi10．3969／j．issn．1000—2561．2014．06．010‘四季蜜’龙眼一年四季均能自然开花

6、结果．叶芽进行过提取．但是所用方法不同．效果也不一该品种在自然条件下．成花不需低温和干旱条件。样ll-2]．因此有必要对‘四季蜜’龙眼芽的总蛋白质花芽分化、开花和座果在高温下仍能正常进行．其提取方法和双向电泳体系进行优化．以期为进一步特殊的开花习性为研究龙眼周年生产提供了便利研究龙眼花芽分化相关的蛋白质组学研究提供参考。通过双向电泳技术分析‘四季蜜’龙眼成花过程蛋白质图谱的差异．寻找与成花相关的蛋白质并进一1材料与方法步分离相关基因．对调控龙眼成花有重要理论意1．1材料义。但龙眼属于顽拗性植物，芽中含有大量的酚1．1．1植物材料供试材料于2012年8月采于福类、多糖及色素等干扰物质，

7、不利于总蛋白质的提建省云霄县源发农场．选择正常挂果的‘四季蜜’取虽然前人研究龙眼成花逆转时曾对普通龙眼花龙眼成年树，选取新梢基部直径>0．5am的顶芽，收稿日期2014—01—03修回日期2014—04—09作者简介欧高政(1982年一)，男，博士研究生；研究方向：果树分子生物学。通讯作者(Corresponderauther)：陈清西(CHENqingxi)，Email：cqx0246@163．eom——1096-热带作物学报第35卷用经净化处理的镊子将