大豆花芽mRNA差异显示技术体系反应条件的优化-论文.pdf

《大豆花芽mRNA差异显示技术体系反应条件的优化-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、吉林农业大学学报2013，35(4)：389～392，397http：／／xuebao．“．edu．CnJournalofJilinAgriculturalUnive~ityE-mail：flrutxb@．sina．corn大豆花芽mRNA差异显示技术体系反应条件的优化王楠，尹俊奇，周莹，姚丹2，马建，曲静，王丕武1．吉林农业大学农学院，长春130118；2．吉林农业大学生命科学学院，长春130118摘要：为建立适用于大豆花芽的mRNA差异显示体系，以“吉农18”花芽突变体为材料，采用RNAisoPlus试剂盒提取

2、了大豆花芽的总RNA，并对DDRT—PCR体系中的ng、dNTP及酶的用量进行了优化。试验结果表明：适合大豆花芽mRNA差异显示的PCR体系(25)为反转录产物用量2．0，锚定引物50pmo1／L，随机引物50pmo1／L，Mg1．5mmol／L，dYI'P0．2mmol／L，raq酶1．5u。关键词：mRNA差异显示技术；大豆；花芽中图分类号：$336文献标识码：A文章编号：1000．5684(2013)040389—04网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detai1／22．1100

3、．S．20130705．1551．010．html引文格式：王楠，尹俊奇，周莹，等．大豆花芽mRNA差异显示技术体系反应条件的优化[J]．吉林农业大学学报，2013，35(4)：389—392，397．OptimizationoftheSystemofSoybeanFlowerBudDiferentialDisplayTechnologyWANGNan’，YINJun—qi’，ZHOUYing’，YAODan，MAJian’，QUJing’，WANGPi—WU’1．CollegeofAgronomy，JilinAg

4、riculturalUniversity，Changchun130118，China；2．CollegeofLifeScience，JilinAgricultural，Changchun130118，ChinaAbstract：Inthisstudy，wechosetheJN18offlowerbuds，andestablishedahigheficientmRNAdiffer—entialdisplaysystem．UsingRNAisoPluskitextractionsoybeanofflowerbudsto

5、talRNA．reversetran．scriptasecDNAsynthesis，chainDDRT—PCRamplificationreactionsystemoptimization，weestablishedasystemsuitableforreversetranscriptionofmRNAdifferentialanalysisofsoybean．ConditionsappropriatetoanalyzethesoybearlPCRreactions(25uL)were2．0uLRTreaction

6、firststrand，50pmol／Lanchorprimer，50pmol／Lrandomprimer，1．5mrnol／LMd，0．2mmol／LdN1’Pand1．5UTaq．KeyWOrds：mRNAdifferentialexpression；soybean；flowerbud大豆作为我国主要的粮食、油料作物，含有丰率约为30％，提高了近5倍，是鉴定大豆四粒荚富的脂肪、蛋白质，是人类重要的营养来源l1-2]。基因的良好材料。大豆荚数、粒数是构成大豆产量的重要因素，增加mRNA差异显示(mRNAdiffe

7、rentialdisplayre—荚数、粒数是提高大豆产量的一个有效途径，因此versetranscriptionPCR，DDRT—PCR)技术j，以鉴定和挖掘大豆荚数、粒数的功能基因具有重要mRNA为模板，选择特定的锚定引物进行反转录，的作用。本试验在前期的研究中获得了大豆四粒通过PCR扩增后，将同一组织不同条件下的差异荚突变体，与野生型“吉农18”相比，四粒荚结荚基因进行分离和克隆。此技术现已被广泛应用，*基金项目：吉林省科技发展重点项目(20090203)，吉林省发改委科学技术研究项目(20090001)作者

8、简介：王楠，女，硕士研究生，研究方向：生物技术在作物遗传育种中的应用。收稿日期：2013—03—05网络出版时间：2013-07—0515：51*通讯作者390吉林农业大学学报2013年8月主要包括植物个体发育的分子机制研究【、杂种下：42cC反应60rain，70cc反应5min，所得样品优势的机理研究]、利用激素l6]或胁迫诱导特异即为cDNA第一条链。