正交法整体优化差异显示反应体系

《正交法整体优化差异显示反应体系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、遗!传!"#"$%&’(!)*+,+-."!"!""##$"!#%&$!&&%研究报告正交法整体优化差异显示反应体系柳淑芳’!!!杜立新$!#!朱!靖’!王爱华$!李宏滨$!’E山东农业大学动物科技学院$泰安!)’&’#)!E国家水产品质量监督检验中心$青岛!""&)’)$E中国农业科学院畜牧研究所$北京’&&&*%"摘!要!CF5G差异显示H=F!CF5G27<<1/18076927I-964H=F$JJF@AH=F"是分离差异表达基因的有效方法$但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响(采用正交法优化JJF@AH=F反应

2、条件$充分考虑到模板浓度*锚定引物浓度*随机引物浓度*25@HI浓度*镁离子浓度以及&/0酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用$一次H=F反应即可确定最佳反应组合(将筛选出的条件用于JJF@AH=F$得到差显结果假阳性率低$重复性和稳定性好$而且简化了反应条件的优选程序$这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法(为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序$降低假阳性率$研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳!-.946:/496C721K19191:0/.->./1I7I$HGLB"和银染显示差异带的方法$并用反向5./0>

3、1/8法来验证回收条带$从而更加优化了差异显示反应体系(关键词!JJF@AH=F)正交优化)非变性HGLB)银染)反向5./0>1/8中图分类号!M)#"!!!文献标识码!G!!!文章编号!&!($N*))!!!&&%"&"N&#$"N&(!"#$%$&$’(#)*+*,-#$.’/01#*%.233+4567+806.1$#$9*5-:.114*1#’$!$JQO7AR78$$#$STQU78K’$VG5LG7AT,6$$OPT.8KAW78$OPQ+>,A;68K!’E1233*.*24’-+5/3(6+*-6*/-7&*68-

4、232.9$(8/-72-.’.:+6;3<;:/3=-+>*:?+<9$&/+/-!)’&’#$18+-/$!E&8*-/<+2-/36*-<*:42:0;/3+<9?;@*:>+?+2-/-7<*?<24/0;/<+6@:27;6<$A+-.7/2!""&)’$18+-/$$E%-?<+<;<*24’-+5/3!;?B/-7:9$18+-*?*’6/7*5924’.:+6;3<;:/3(6+*-6*$)*+,+-.’&&&*%$18+-/";81#:,-##@>1C10>.2.

5、F!JJF@AH=F"7I,I120.721807<427<<1/180769941D-/1II12K181IX72194?@.7C-/.Y1<,/0>1/0>11<<7:718:4682/1-/.2,:7379704.<0>1C10>.2$0>1-.I707Y1A:/.II01I0X1/1-1/<./C120.<7820>1.-07.869:.82707.8I.1I7D:/707:69-6/6C101/I.<25@HI$[K=9!$6/370/6/4-/7C1/$68:>./-/7C1/

6、$@618Z4C1$68201C-9601I4I01C607:6994?@>11D-1/7C18069<78278KI21978160120>131I0-.II7391JJF@AH=F:.82707.8I<./6C./1/19763916II1IIC180.<27<<1/180769K1811D-/1II7.8?G22707.86994$780>7II0,24$8.8A21860,/78K-.946:/496C721K19191:0/.->./1I7I!HGLB"682I79Y1/I0/67878KX1/162.-0120./12

7、,:10>1<69I1A-.I707Y1/607.$6820>1/1:967C121/868694I7I?;786994$X1.30678120>1.-07C69:.8A2707.8<./JJF@AH=F?<*0=.:>1#JJF@AH=F)-.I707Y1A:/.II01I0)8.821860,/78KHGLB)I79Y1/I0/67878K)/1Y1/I15./0>1/8!!CF5G差异显示是分离差异表达基因的有效于多种差异基因的筛选和克隆$并有许多成功的范%

8、’$!&方法(自从JJF@AH=F发明以来$已被广泛用例$但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因收稿日期!!&&$’!’("修回日期!!&&%&$’%基金项目!国家自然科学基金资助项目!$&!)&*%*"资助%+,--./01234