吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术的建立与优化-论文.pdf

《吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术的建立与优化-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、西南农业学报2013年26卷5期2122SouthwestChinaJournalofAgricuhnralSciencesVo1．26Nn5文章编号：1001—4829(2013)05—2122—05吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术的建立与优化朱佳杰。，沈夏霜，付强，周宇，谭芸，甘西¨(1．广西壮族自治区水产研究所，广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西南宁530021；2．广西大学，广西南宁530004)摘要：以吉富罗非鱼为研究对象，通过对其肝脏蛋白质的提取方法、等电聚焦程序和IPG胶条PH选择这几个关

2、键环节的优化探索，建立了吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术体系。结果表明：①采用液氮研磨法比匀浆器匀浆法提取蛋白质的效果更好；②聚焦时延长除盐时间至10h，同时升高电压至8000V，可获得清晰的电泳图谱；③通过双向电泳检测到吉富罗非鱼肝脏的蛋白点主要分布于pH值4．0～7．0之间。该技术体系的建立为今后开展罗非鱼蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。关键词：吉富罗非鱼；肝脏；蛋白质组学；双向电泳中图分类号：$965．125文献标识码：AEstablishmentandOptimizationAnalysisofTwo

3、-dimensionalElectrophoresisSystemonGIFTTilapiaLiverZHUJia-jie‘，SHENXia．shuang，FUQiang2，ZHOUYu，TANYun。，GANXi‘‘(I．GuangxiInstituteofFisheries，GuangxiKeyLabofAquaticGeneticBreedingandHealeyAquaculture，GuangxiNanning530021，Chi-na；2．GuangxiUniversity，GuangxiNannin

4、g530004，China)Abstract：Inthepresentstudy，geneticimprovementoffarmedtilapia(GIFt)wasusedasstudymaterialintheexperiment．Thetwo。di-mcnsionalclectrophoresis(2-DE)forGIFTliverwasestablishedandoptimizedthroughcomparativetestsbyusingdiferentextractionmeth·ods，isoele

5、ctricfocusingprogramsandimmobilizedpHgradients(IPG)strips．Theresultsshowedthat(i)theefectofextractionproteinliquidnitrogenndingwasbetterthanthehomogenatemachine；(ii)thedesalfingtimeaddeduptolOhandthevoltageroseto8000V，whichcouldgetmorecleantwo—dimensionalelec

6、trephoresismap；(iii)TheproteinsofGIFTliverwereobtainedinpH4．0—7．0by2-DEdetection．SOatwodimensionalelectrophoresisworkflowforG1Frtilapiaproteinsseparationhadbeenestablishment．whichcouldlaidafoun-dationforthefurtherstudyondiferentialproteomicsoftilapia．Keywords

7、：GIFT；Liver；Proteome；Two—dimensionalelectrophoresis(2-DE)吉富罗非鱼(GI丌strainOreochramniloticus)是也是目前生物学研究的热点。蛋白质组学(pro—通过尼罗罗非鱼的4个亚洲品系和4个非洲品系等teome)由Wilkins等于1994年首次提出，并定义广泛的种质资源选育而成的新品种¨J。具有食性为“由基因组所表达的全部蛋白质”。目前，蛋白质广、环境适应性强、生长快、群体产量高、肉味鲜美等组学已成为生命科学研究中的一个重要领域，而双特点

8、，深受广大消费者的青睐，目前已成为中国罗非向电泳(Two—dimensionalelectrophoresis，2-DE)是蛋鱼养殖的主导品种。白质组学核心分离技术之一-4J，被广泛应用于水产蛋白组学是后基因组学时代的重要研究方法，品种研究，在大黄鱼(Pseudosciaenacrocea)、中国对虾(Penaeuschinensis)、草鱼(Ctenopharyngod