DAPT及顺铂对人卵巢癌H08910细胞生物学性能的影响-论文.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第15期DAPT及顺铂对人卵巢癌H08910细胞生物学性能的影响于楠¨，闰洪超(1徐州医学院研究生学院，江苏徐州221002；2徐州医学院附属医院)摘要：目的观察．y一分泌酶抑制剂DAPT及顺铂对人卵巢癌HO8910细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响，为卵巢癌治疗提供新思路。方法常规培养HO8910细胞至对数生长期，随机分为DAPT组、顺铂组、联合组及对照组，前三组分别以不同质量浓度DAPT、顺铂及DAPT+顺铂处理，采用四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法检测细胞增殖情况，倒置显微镜观察

2、细胞形态变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率，体外迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果与对照组比较，DAPT组、联合组细胞增殖明显受抑(P均<0．05)，且呈DAPT作用时间和剂量依赖性，尤以联合组为著(P<0．05)；倒置显微镜下对照组细胞形态正常，DAPT组及联合组均出现细胞密度减低及凋亡现象；DAPT组、顺铂组、联合组细胞凋亡率均显著高于对照组(P均<0．05)，尤以联合组为著(P均<0．05)；与对照组比较，余三组细胞迁移抑制率、细胞侵袭抑制率均显著升高(P均<0．05)，尤以联合组为著(P均<0．05

3、)。结论DAFF与顺铂可协同抑制人卵巢癌HO8910细胞增殖、促进细胞凋亡、降低细胞侵袭及迁移能力，此为卵巢癌的治疗提供了新思路。关键词：卵巢癌；Notch信号通路；．分泌酶抑制剂DAPT；顺铂doi：10．3969／j．issn．1002—266X．2014．15．013中图分类号：R737．31文献标志码：A文章编号：1002—266X(2014)15-o039-o3目前，卵巢癌主要采取手术为主、化疗为辅的综1．2实验方法合治疗方案，其中铂类是较常应用的抗肿瘤药物。1．2．1细胞培养及DAPT、顺铂干预将H

4、O8910但由于肿瘤细胞耐药性的产生，化疗效果往往欠佳。细胞置含10％FBS的RPMI1640培养基中，于Notch信号通路作为近年来的研究热点，已被证实37℃、5％CO：的恒温培养箱内传代培养，至对数生与多种肿瘤的发生、发展及耐药性之间存在密切关长期后收集细胞，胰酶消化制成1．5×10／mL单细系，其中Notch-1受体为研究最多的Notch受体胞悬液，以每孔100接种于96孔板，置于培养箱家族成员，对肿瘤细胞的生长、增殖和凋亡过程起重中培养24h，待细胞贴壁后弃孑L内培养基并随机分要调控作用J。．分泌酶抑制

5、剂DAPT为Notch一1为顺铂组、DAPT组、联合组、对照组，其中顺铂组加受体的抑制剂，近年来受到广泛关注。2013年5入顺铂终质量浓度为2．5、5、7．5、10~g／mL的RP—月，我们观察了DAPT及顺铂对卵巢癌HO8910细MI1640培养基(FBS血清终浓度为1％)，DAPT组胞株生物学行为的影响，旨在为卵巢癌治疗提供新加入DAPT终质量浓度为20、40、80、100~g／mL的的思路。RPMI1640培养基，联合组加入顺铂(2．5、5、7．5g／1材料与方法mL)及DAPT(20、40、80~g／m

6、L)，对照组则仅加入1．1材料人卵巢癌HO8910细胞株、RPMI1640RPM11640培养基。培养基、四甲基偶氮唑蓝(MTr)及AnnexinV／PI双1．2．2细胞增殖能力检测采用MTr法。上述各染凋亡试剂盒均购自南京凯基生物科技发展有限公组细胞分别培养24、48、72h后弃去培养基，加MTr司，胎牛血清(FBS)购自杭州四季青生物工程材料工作液20L，继续于37oC、5％CO培养箱中培养有限公司，顺铂为齐鲁公司产品，DAPT购自上海瀚4h，加入二甲基亚砜终止反应，于酶联免疫检测仪香生物科技有限公司，Mi

7、llicell细胞插入皿及细胞外上测定各孔490nm处的吸光度(A)值，计算细胞增基质胶(ECMge1)蛋白购自Sigma公司。殖抑制率并绘制细胞生长曲线。细胞增殖抑制率=(对照组A值一实验组A值)／对照组A值×通信作者：闫洪超100％。用金氏公式计算两药的相互作用指在读硕士研究生数(q)。39山东医药2014年第54卷第15期1．2．3细胞形态学观察倒置显微镜下观察上述膜细胞数。细胞迁移抑制率=(1一实验组迁移细各组细胞形态学变化。胞数／对照组迁移细胞数)×100％。1．2．4细胞凋亡率测算取对数生长期HO8

8、9101．2．6细胞体外侵袭能力测定实验分组及步骤同细胞接种于6孑L培养板中，继续培养24h后更换培1．2．5，仅于小室加入各组悬液前在Millicell细胞插养液。同上设置DAPT组(DAPT质量浓度为4O入皿上层铺上1：3的ECMgel。细胞侵袭抑制率=(1~xg／mL)、顺铂组(顺铂质量浓度为5Ixg／mL)、联合一实验组侵袭细胞数／对照组侵袭细胞数)×100％。组(40Ixg／