川贝母悬浮培养细胞活力测定条件的优化-论文.pdf

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1、2014年27卷4期西南农业学报V0L27N4SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences1691文章编号：1001—4829(2014)04—1691—04川贝母悬浮培养细胞活力测定条件的优化王跃华，何诗虹，郭翠平，江明殊，王晓蓉。，刘涛h(1．成都大学生物产业学院，四川成都610016；2．四川师范大学生命科学院，四川成都610101；3．成都恩威集团(投资)有限公司，四川成都610041)摘要：为了利用四氮唑脱氢酶还原法测定川贝母悬浮培养细胞的活力，并对

2、影响其活力测定的各种因素进行了研究。选取四氮唑脱氢酶还原法测定了经三次继代培养的川贝母悬浮培养细胞的活力，并研究了不同四氮唑溶液浓度、缓冲液种类和pH值以及脱氢酶还原反应时间对川贝母悬浮培养细胞活力测定的影响。通过实验得出用四氮唑脱氢酶还原法测定川贝母悬浮细胞活力的最佳条件为：四氮唑溶液最适浓度0．6％，脱氢酶还原反应在Tris．HC1缓冲液中的效果优于磷酸缓冲液和磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液，最适pH为7．0—7．5；脱氢酶最适还原反应的时间为18h。关键词：氯化三苯基四氮唑；脱氢酶；细胞活力中图分类号

3、：s567．231文献标识码：ADeterminationConditionOptimizationofSuspensionCultureofFritfllariaCellWANGYue—hua。HEShi-hong，GUOCui—ping，JIANGMing-shu·2WANGXiao．ronbOLIOUTaol‘，，，(1．DepartmentofBiologicalEnglneering，ChengduuIliversity，SichuanChengdu610016，China；2．CoHege

4、ofLifeScience，SichnanNor-malUniversity，SichuanChengdu610101，China；3．ChengduEnweiGroupCo．，SichuanChengdu610041，China)Abstract：Theviabilityoffrltillariacellbysuspensioneuhurew舶measuredbyrI℃dehydrngenasereductionmethodtostudytheefectsofdiferenttetrazolecon

5、centration，bufertypes，pHandthethereductionreactiontimeontheceilviability．The~sultsshowedthattheoptimumconditionsoftheviabilitydeterminationoffritillariacellthattheoptimumtetrazoleconcentrationW886％．theTris—HQbuferW88supe-rlortothephosphatebuferanddisodi

6、umhydrogenphosphate-citricacidbufer，theoptimumpHwar7．5andtheoptimumreductionreactiontimewag18h．Keywords：Chlorinatedtriphenylfourazolenitrogen；Dehydrogenase；Ceilvitality植物细胞悬浮培养是当今利用生物工程技术大培养细胞的活力水平；该方法的优点在于操作简单，规模发酵生产药用植物次生代谢产物的重要方法，测定结果快速，故被广泛应用。但由于在用此

7、法测目前国内外研究工作者已利用该技术生产了近百种定不同植物细胞活力时，易受到不同因素的影响；因药用植物的次生代谢产物uJ。然而在药用植物进此本文有针对性地研究了影响川贝母悬浮培养细胞行细胞悬浮培养过程中，适时掌控其培养细胞的活活力水平测定的主要因素，并筛选出测定其细胞活力水平，是确保悬浮培养生产药用植物细胞顺利实力的最适条件，为大规模开展川贝母植物细胞的工施的关键。业化发酵生产提供重要的技术支撑。氯化三苯基四氮唑脱氢酶还原法(简称四氮唑1材料与方法脱氢酶还原法)是一种有效的测定细胞活力的方法。该方法最

8、初运用在对植物种子的活力测1．1材料定。近年来，随着药用植物细胞悬浮培养工作培养的川贝母悬浮细胞由成都大学生物技术实的大规模开展，也逐步被众多学者用于测定其悬浮验室培育。收稿日期：2013—09—191．2主要试剂基金项目：成都市科技计划项目(12GGYB413sw_001)；成都市1．2．1四氮唑溶液称取四氮唑试剂粉末，用蒸馏经济和信息化委员会资助的科研项目(2012)作者简介：王跃华(1963一)，女，教授，从事于生药学研究，E—水配制成浓度为O．O