肠道病毒EV71 IgM抗体参考品的建立-论文.pdf

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1、微生物学免疫学进展2014年6月第42卷第3期ProginMicrobiolImmunol，Jun．2014，Vo1．42No．3·13··论著·肠道病毒EV71IgM抗体参考品的建立范行良，高加梅，葛胜祥，刘艳，赵慧，国泰，李长贵，徐飞海，夏宁邵，王军志1．中国食品药品检定研究院，北京100050；2．国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，福建厦门361005摘要：目的建立肠道病毒EV71IgM抗体检测用参考血清盘。方法通过收集手足口病感染早期患者的咽拭子和血清，对咽拭子病毒进行分离、鉴定、基因分型，通过血清中和试验及酶联免

2、疫吸附试验(捕获法)的验证，确定EV71IgM抗体阳性样品，组建EV71IgM抗体参考血清盘，并经3家实验室对该参考血清盘进行协同标定和确认。结果12名患儿的咽拭子中均分离到EV71病毒，在RD细胞上引起细胞病变。通过套式PCR扩增、序列测定后进化树分析确认均为流行的c4基因亚型。每名患儿的双份血清均可中和Ev71病毒，抗体效价为1：512～1：2048。通过捕获法进行EV71IgM抗体检测结果均为阳性。以此12份样品为原料制备EV71IgM抗体阳性参考品，同时以12份EV71IgM抗体阴性血清制备阴性参考品，建立了由12份阳性参

3、考品、12份阴性参考品、1份最低检出限参考品和1份精密性参考品组成的肠道病毒Ev71IgM抗体参考血清盘。通过3家实验室协同标定，各实验室间差异均无统计学意义。结论建立了EV71IgM抗体检测参考血清盘，为相关检测试剂的质量控制和评价提供了参考标准。关键词：EV71；IgM抗体；国家参考品中图分类号：R373．2文献标志码：ADOI：10．13309／j．cnki．pmi．2014．03．003EstablishmentofthereferencepanelforEV71IgMantibodiestestingFANXing—li

4、ang，GAOJia·mei，GESheng—xiang，LIUYan，ZHAOHui，GUOTai，LIChang—gui，XUFei—hal，XIANing—shao，WANGJun·zhiNationalInstituteforFoodandDrugControl，Beijing100050，ChinaCorrespondingauthor：WANGJun—zhi，E—mail：wangfl@n卸．org．cnAbstract：ObjectiveTodevelopthenewnationalreferencepanelfor

5、testingintestinalvirusEV71IgMantibody．Meth-odsTheserumsamplesandthroatswabsfromHFMDpatientswerecollected，andtheswabsampleswereusedforfurthervirusisolating，identifyingandgenotyping．TheEV71IgMantibodypositivesampleswereverifiedbyneutralizationtestandELISA(capturemethod)

6、toestablishEV71IgMantobodypositivesamplesandconstructthenationalreferencepane1．Re-suitsTheEV71virusfromswabswereallisolatedin12patients．ThesevirusresultedinthepathologicalchangesofRDcells．TheisolatedviruswereconfirmedasepidemicG4subtypevirusbythenestedPCR，sequencingan

7、dphylogenetictreeanalysis．ThedoublesamplesfromeachpatientcouldneutralizetheEV71virus．Theantibodytitersrangedfrom1：512to1：2048．andthetestedresultsofIgMantibodiesagainstEV71viruswereallpositive．TheEw1IgMantibodypositivereferencewasdevelopedusing12positiveselqlmsamplesas

8、rawmaterials，andatthesametime，thenegativereferenceforEV71IgMantibodytestingwasalsodeveloped．Newnationalreferencepanelfortest