草莓果实cDNA文库的构建及鉴定-论文.pdf

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1、第29卷第2期北京农学院学报V01．29，NO．22014年4月JOURNALOFBEIJINGUNIVERSITYOFAGRICULTUREApr．，2014草莓果实cDNA文库的构建及鉴定张少会，沈元月(北京市农业应用新技术重点实验室，北京农学院植物科学技术学院，北京102206)摘要：草莓是研究果实发育的模式植物。基因表达谱分析已成为目前分子生物学领域重要的研究方向。草莓cDNA文库构建是研究果实发育基因表达的基础工作。本研究从草莓白果中提取高质量的总RNA，通过MMIV反转录酶的作用，把RNA中的mRNA反转成cD

2、NA第一链，再利用特异引物通过LD-PCR扩增合成双链cDNA。将纯化带有黏性末端的双链cDNA与kTripIEx2载体进行连接，最后对重组载体进行E．coliXI1一Blue体外包埋为cDNA原始文库。经过鉴定，原始文库的滴度为1．13×10～cfu／mL，重组率为100，插入片段多分布在0．2-2．0kb之间，表明构建的草莓果实cDNA文库质量较高，能够满足后续的分子生物学研究工作的需要，同时也为其他果树相关研究提供借鉴。关键词：草莓果实；RNA提取；cDNA文库中图分类号：$668．4网络出版地址：http：／／ww

3、w．cnki．net／kcms／detail／】】．2156．S．20140507．2042．062．html文章编号：1002—3186(2014)02—0012·O3文献标志码：Adoi：10．13473／j．cnki．issn．1002—3186．2014．0052ConstructionofacDNAlibraryofstraberryfruitZHANGShaohui，SHENYuanyue(BeijingKeyLabofNew—techinAgricultureApplication，BeijingUniver

4、sityofAgriculture，Beijing102206，China)Abstract：Strawherryisamodelplantforfruitdevelopmentresearch．Geneexpressionprofilingisanimportantresearchfieldofmolecularbiology．Thus，constructionofcDNA1ibrary1aysfoundationonstudyingfruitdevelopment—relatedgeneexpressioninstra

5、wberry．Inthisstudy，totalRNAwasisolatedfromfruitsofstrawberrywhitefruitstage，singlestrandcDNAwassyn—thesizedbasedontheextractedmRNAsoftotalRNAusingMMIVreversetranscriptase．anddoublestrandcDNAsweresyn—thesizedusingPCR，thendoublestrandcDNAswerepurifiedandpackagedbyth

6、ephagepackagingsystemandligatedtothebluntedTripEx2vector，finallytransformedintotherecombinantvectorofE．coliXL1一Blue．Theresultsshowedthatthecon—structedcDNAlibraryiSofthetiterof1．13×lOcfu／m1，theinsertsizesiSbetween0．2～2kh，andrecombinationrateofthecDNAlibraryreached

7、i00，indicatingthatahighercDNAlibraryofstrawberryfruitisconstructed，whichmeetstheneedsofsubsequentmolecularbiologyresearch，meanwhileprovidesafoundationforotherfruittreerelatedstudies．Keywords：strawberryfruit；RNAextract；cDNAlibrary近年来，随着基因大规模、高通量测序的实现，基因表达莓果实发育特殊的白果

8、期果实为试验材料，在提取分离高质谱分析在挖掘新基因及基因新功能方面具有明显的优势，目量RNA的基础上，通过反转录、PCR扩增、载体连接、体外前已成为分子生物学领域重要的研究方向。cDNA文库代包埋等一系列cDNA文库构建的操作，成功构建草莓果实高表mRNA的反转录复本，从中可以分离各种cDNA，在研究质