肿瘤干细胞在人骨肉瘤细胞株MG63耐顺铂效应中的作用.pdf

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1、·828·中华实验外科杂志2014年4月第31卷第4期ChinJExpSurg，April2014，Vo1．31，No．4·实验研究·肿瘤干细胞在人骨肉瘤细胞株MG63耐JJb~,Cn效应中的作用张明生刘萍萍朱宇张仲宁陈清汉韩娜【摘要】目的观察肿瘤干细胞在人骨肉瘤细胞株对顺铂(CDDP)产生获得性耐药中的作用。方法采用大剂量冲击结合逐步增加剂量(1、3、5mg／L依次递增)的方法诱导产生人骨肉瘤耐CDDP细胞株，0．20mg／L的As，O逆转耐药株的耐药性，噻唑蓝(MTT)法和实时定量聚合酶链反应(Re

2、al—timePCR)分别检测细胞株对CDDP的敏感性和let一7、微小RNA(miR)一200c以及性别决定区Y框蛋白一2(SOX一2)的表达。结果耐药株的耐药性显著高于亲本株(P<0．01)。As，O降低了耐药株对CDDP的耐药性，逆转倍数为3．39，相对逆转效率为76．6％。相对于亲本株，耐药株细胞let-7和miR-200c的表达显著降低(P<0．05)，SOX一2的表达显著升高(P<0．01)。AsO处理后，耐药株细胞let-7和miR一200c的表达显著增加(P<0．05)，SOX一2的表达

3、显著下降(P<0．05)。结论CSC有可能是人骨肉瘤细胞株MG63对CDDP产生耐药的机制之一。【关键词】骨肉瘤；耐药；顺铂；肿瘤干细胞TheroleofcancerstemcellsintheacquiredresistancetocisplatinofhumanosteosarcomacelllineMG63ZhangMingsheng，LiuPingping，ZhuYu，ZhangZhongning，ChenQinghan，HanNa．DepartmentofOrthopaedics，theSec

4、ondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014，ChinaCorrespondingauthor：HanNn，Email：592501251@qq．corn【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheroleofcancerstemceils(CSC)intheacquiredresist—ancetocisplatinfCDDP)ofhumanosteosareomaeelllineMG63．Methods

5、CDDP—resistanthumanos—teosarcomacelllineM(3fMG63／CDDP)wasestablishedvitrobyexposuretohighandgraduallyin—creaseddoseofcisplatin(13，5Ing／L)．TheproliferationandsensitivitytoCDDPofMG63／CDDPbeforeandafterapplicationofAs2O3(0．20mg／L)weretestedusingmethylthiazo

6、ltetrazolium(M1Tr)assay．Real—timequantitativepolymerasechainreaction(Real—timePCR)wasemployedtoinvestigatetheexpressionoflet-7，microRNA(miR)一200candsexdeterminingregionY—box2(SOX．2)inMG63／CDDPcellsbe—foreandafterapplicationofAs2O3．Results(1)Inthepresence

7、ofCDDP(3mg／L)，thegrowthrateofMG63／CDDPwassignificantlyhighercomparedwithMG63cells(P<0．01)．ItwasalsodemonstratedthatMG63／CDDPtreatedbyCDDPdevelopedsimilarproliferationtoMG63cellswithouttreatmentofCDDP(P>0．05)．TheICofMG63andMG63／CDDPcellstoCDDPwereabout6．3

8、mg／Land78．9mg／Lre—spectivelyandtheresistanceindexwasabout12．52．f2)TheresistanceofMG63／CDDPcellstoCDDPwasreducedbytreatmentofAs，0(0．20mL)withreversedmultiplesof3．39andrelativereversedeffi—ciencyof76．6％．(3)MG63／CDDPcellsexpr