血管紧张素转化酶在原发性肝细胞癌中的基因转录.pdf

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1、广东医学2014年6月第35卷第l2期GuangdongMedicalJournalJun．2014，Vo1．35．No．12·1887·血管紧张素转化酶在原发性肝细胞癌中的基因转录木齐明华，刘吉奎，叶静，漆正宇，万汇涓，李明华，余光银，尹耀新，欧希北京大学深圳医院’感染性疾病科，肝胆外科，。中心实验室，病理科(广东深圳518036)【摘要】目的通过比较原发性肝细胞癌及其癌旁组织的转录差异，探讨血管紧张素转化酶(ACE)对原发性肝细胞癌发生的影响。方法采用荧光定量PCR法对13例原发性肝细胞癌及癌旁组织和3例正常肝组织中ACE1、ACE2及其受体AT1R和

2、MAS的基因转录水平进行检测。结果ACE1、AT1R在原发性肝细胞癌中基因转录水平较癌旁组织高，MAS基因转录水平在原发性肝细胞癌中基因转录水平较癌旁组织低，差异均有统计学意义(均P<0．01)。结论ACE1、ACE2及其受体AT1R和MAS基因在原发性肝细胞癌发生中可能起调控作用。【关键词】血管紧张素转化酶；AT1R；MAS；原发性肝细胞癌近年来，人们发现，除了系统中存在的肾素一血管PCR试剂盒及SYBRGreenqPCR试剂盒均购自Fer-紧张素系统(RAS)之外，肾脏、肝脏、肺、心脏这些器官mantas公司。ACE1、ACE2、AT1R及MAS引物由

3、上海局部还存在RAS组分，它们在器官纤维化、肿瘤发生生工公司合成，见表1。中都起到作用⋯。RAS在恶性肿瘤中表达失衡，而且表1试验中用到的引物序列与预后密切相关。RAS组分的主要成分包括：由肝脏基因上游引物(5一3)下游引物(5一3)合成的血管紧张素原，在肾素的作用下，转换为血管18sRNATGAGGCCATGAITrAAGAGGGGGTCGGCATCGrTrATGGTC紧张素I(angiotensinI，AngI)，Ang1分别在血管ACE1TGGAGGGTA

4、rITGATGGAAGGIIAAGGCACGCTAGAAGGAA紧张素转换酶1(ACE1)作用

5、下，降解为血管紧张素ⅡAT1RGGAAACAGCTTGGTGGTGATCCAGCGGTAIrrCCATAGCTG(AngII)；或者在血管紧张素转化酶2(angiotensincon—ACE2CTGCTCAI’ITGCTTGGTGATGGTCCACCA1TrGCATCAGTAvertingenzyme2，ACE2)的作用下，降解为7肽，即MAS兀lcCGGATGAGAAGAAATCCATGGCCAGAAGAAAGCTCATAng1—7。AngII通过AT1R受体起作用，形成ACE—1．3方法分别称取一80~C冰箱保存的13例配对组AngII—AT1R受体轴

6、；Ang1—7通过MAS受体起作织标本各100mg。Trizol法提取组织总RNA，经酚氯用，形成ACE2一Ang1—7一MAS受体轴。两个轴相互仿抽提纯化。用紫外分光光度仪测定A印／A。值均在制衡，实现对生理功能的调节。而这两个调控轴中，1．9～2．0之间，RNA纯度较好。使用Fermantas公司ACE1和ACE2及其受体的作用又备受关注。研究逆转录试剂盒，oligo(dT)为引物，按标准流程合成发现，ACE1及其受体AT1R有促进肿瘤生长的作用；cDNA。RT—qPCR的△ACT法相对定量ACE1、ACE2ACE2及其受体MAS的作用则相反，它有拮抗

7、ACE及及其受体AT1R、MAS基因的转录水平。采用Ferman．AT1R，抑制肿瘤增长的作用。但是，前人的研究tas荧光定量试剂盒，按标准流程，二步法在ABIPrism多集中在乳腺癌、胃癌、结肠癌。本研究从临床标7000荧光定量PCR仪上进行qPCR反应，95。I=初步变本人手，通过自身对照，初步探讨癌组织和癌旁组织血性10min，95℃变性15S，60℃延伸30S，共30个循环管紧张素转化酶及其受体基因转录水平，初步揭示反应。反应内参为B—actin。每批实验均设立阴性对ACE—AngⅡ一AT1R受体轴和ACE2一Ang1—7一照及阳性对照。MAS受体

8、轴在原发性肝细胞癌中的可能作用。1．4统计学方法使用SPSS10．0统计软件，采用t1资料与方法检验评价原发性肝细胞癌组织与癌旁组织间各基因转1．I一般资料13例原发性肝细胞癌和癌旁组织标录水平的差异。本均为我院2010年1月至2011年12月手术切除标2结果本，男l0例，女3例，年龄(45±3．28)岁，病理学资料原发性肝细胞癌组织中，ACE1和AT1R的基因转齐全。患者均未接受放化疗。3例正常肝组织来源于录水平均高于对应的癌旁组织(P<0．05)，而MAS受2例男性，1例女性，年龄分别为35、52、60岁。体基因的转录水平则低于对于对应的癌旁组织(P<

9、1．2试剂Trizol试剂购自Invitrogen公司。RT—0．