血管紧张素转化酶37778讲课教案.ppt

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1、血管紧张素转化酶的测定及其临床意义检验科概述血管紧张素转化酶（ACE）又称激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶，系统命名为肽基-二肽水解酶。属血管内皮细胞膜结合酶，由肽的C端将氨基酸切为两段变换而来，可使肽链C端二肽残基水解。ACE可催化血管紧张素Ⅰ（十肽）水解成八肽的血管紧张素Ⅱ，使血管进一步收缩，血压升高。也可作用于肾上腺皮质，促进醛固酮的分泌。因此，ACE是肾素-血管紧张素-醛固酮的重要成分。概述ACE还催化具有降压作用的缓激肽水解而失去活性。ACE广泛分布于人体各组织，以附睾、睾丸及肺的含量较丰富，其中肺毛细血管内皮细胞ACE活性最高。肾、脑垂体等组织酶活性较低。ACE测定方法主要有比色法、酶偶联

2、法等。血管紧张素转换酶的别名：血管紧张素转化酶转换酶的测定原理血管紧张素.（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：底物马尿酰-甘氨酰-甘氨酸（Hip-Gly-Gly）在ACE作用下，释放出甘氨酰-甘氨酸（Gly-Gly），后者与三硝基苯磺酸（TNBS）作用，生成黄色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸（TNP-Gly-Gly），其含量与ACE活性呈正相关。（2）酶偶联法：ACE使底物马尿酸双甘肽（Hip-Gly-Gly）水解成马尿酸（Hip）和双甘肽（Gly-Gly），后者与L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺（GGCN）和γ-谷氨酰基转移酶（GGT）偶联，形成3-羧基-4-硝基苯胺，在340nm处测

3、其吸光度，以反映ACE活性。试剂（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：①底物液：用5mmol/L的Tris溶液配制30mmol/LHGG溶液，此液中含0.4mol/LNa2SO4、0.3mol/LNaCl，调pH7.3。②0.1mol/L硼酸盐缓冲液（pH9.0）。③100g/L钨酸钠（含2个水）溶液。④0.33mol/LNaSO4。⑤60mmol/LTNBS溶液（2）酶偶联法：①50mmol/LHEPES缓冲液：称羟、乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）1.191g，加双蒸馏水100ml溶解，用于配制GGT、CGCN和基质缓冲液。②20kU/LGGT贮存液：取HEPES缓冲液5ml，加入GGT10

4、0U，混匀后分装小瓶，－20℃。保存。③6.7kU/LGGT应用液：将上述贮存液用二倍量的HEPES稀释配制。④0.1mmol/LGGCN溶液：称GGCN20mg，加入50mmol/LHEPES60ml，溶解后4℃保存。⑤基质缓冲液：称HEPES1.191g，NaCl1.755g，Na2SO45.68g，用双蒸馏水溶解后，用NaOH调pH至8.0，再补充双蒸馏水至100ml，4℃保存。⑥基质液：由Hip-Gly-Gly89.5mg加基质缓冲液10ml溶解混合而成。此液各试剂终浓度为：HEPES50mmol/L，NaCl30mmol/L，Na2SO4400mmol/L，Hip-Gly-Gly30

5、mmol/L。⑦10mmol/L双甘肽标准液：称Gly-Gly52.9mg加双蒸馏水溶解，并稀释至100ml，此为贮存液（40mmol/L）。1份贮存液和3份双蒸馏水混合即为应用液。正常值（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：26.1～56.7kU/L。（2）酶偶联法：12-68U/L。化验结果临床意义血清ACE测定主要同于肺部疾病的诊断，对其他系统疾病的诊疗也有一定价值。(1)肺部疾病：绝大多数结节病患者血清ACE活力升高，其阳性率及幅度与病活动与否和病变累及的范围有关。肺结核也可升高，而哮喘发作、急性心原性肺水肿、慢性阻塞性肺疾患、自发性气胸、肺纤维化、成人呼吸窘迫综合征等血清ACE均有

6、不同程度下降。（2）肝脏疾病：多数肝脏病患者ACE活性升高，升高幅度依次为肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝则正常。（3）甲状腺疾病：甲亢患者ACE活性明显高于其他甲状腺疾病，且酶活力高低与T3、T4含量呈正相关。（4）其他：糖尿病、虹膜炎、免疫母细胞肉瘤等，血清ACE升高；高血压、结肠炎等则降低。附注（1）三硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：①标本在室温或冰箱存放1周，酶活力无明显变化，－15℃保存3周酶活性稳定。②胆红素对ACE有明显抑制作用，故重度黄疸可使测定结果偏低。EDTA是ACE的强抑制剂，NaCl和Na2SO4对ACE有明显的活化作用，溶血、脂血对结果无影响。③本法与紫外分光光度法

7、酶活力单位一致，但其测得值为紫外法的9倍。（2）酶偶联法：①当底物pH8.0，GGCN1.0mmol/L，GGT6.7ku/L时，ACE活性与吸光度值有良好线性。线性范围大，即使ACE在1500U/L，不用稀释也可获得理想结果。②GGCN浓度选择：本反应体系中GGCN既是测定酶ACE的受体，又是指示酶GGT的供体。以1.0mmol/L的GGCN最理想，在此浓度下GGCN与吸光度保持良好的线性。③G