猪肺血管紧张素转化酶的提取与纯化.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhureISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．4．639猪肺血管紧张素转化酶的提取与纯化周利琴，廖丹葵+，孙建华，伍善广，兰雄雕，周敬豪，徐存华(广西大学化学化工学院，南宁530004)摘要：【目的】研究猪肺血管紧张素转化酶(ACE)的提纯方法，为其生产利用提供技术支撑。【方法】以新鲜猪肺组织为试验材料，匀浆离心后经硫酸铵分级沉淀透析，然后采用离子交换一超滤离心联合法对猪肺ACE粗提物进行纯化，测定ACE的分子量、酶活力、纯化倍数及酶活力回收率。【结果】

2、通过离子交换一超滤离心联合法分离纯化猪肺ACE，可得到相对分子量182kDa、酶比活力1．2476U／mg的电泳级纯品ACE，其纯化倍数达357．31倍，酶活力回收率达12．28％。ACE{崔化反应动力学米氏常数(Km)为0．849mmol／L，最大反应速率(v一)为9．775nmol／min。【结论】采用离子交换一超滤离心联合法纯化猪肺AcE能够极大缩短分离与纯化时间，且获得较高的纯化倍数和酶活力回收率，是猪肺ACE的高效纯化方法。关键词：血管紧张素转化酶；猪肺；阴离子交换；超滤离心；纯化中图分类号：Q814．1文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)04—0639—04E

3、xtractionandpurificationofangiotensinconvertingenzymefromfleshhoglungZHOULi—qin，LIAODan-kui+，SUNJian—hua，WUShan—guang，LANXiong—diao，ZHOUJing-hao，XUCun—hua(SchoolofChemistUandChemicalEngineering，GuangxiUniversity，Nanning530004，China)Abstract：【0bjective】Extractionandpurificationofangiotensinconvenin

4、genzynle(ACE)wasstudiedtoprovidetechni—calsupporttoritsproductionandutilization．【Method]ACEetudeextractswerepurifiedbyDEAE—SepharoseFFanionex—changeanduhrafihrationafterthefleshlunghomogenatewascentrifuged，precipitatedanddialyzedusing8nlnloniunlsulfate．ACEmolecularweight，specificactivity，purificat

5、ionMdandactivityrecoveryweredetermined．【ResuhlLungACEobtainedbySDS—PAGEshowedACE—pureandmolecularlnasswas182kDa．TheACEwaspurifiedto357．31_{jldwithsDecificactivitvo±1．2476U／mgandactivityrecoveryof12．28％．TheMichaelis—constantoftheACEwas0．849mmol／LandV—Was9．775nmol／nlin．【Conclusion]Theionexchange—uhr

6、afihrationisanefficientpurificationmethodforlungACE，asitcangreatlyshorlentheseparationandpurificationtime，andgetahigherpurificationfoldandactivityrecovery．Keywords：angiotensinconvertingenzyme；hoglung；anionexchange；uhrafihrationcentrithgation；purification0引吾【研究意义】血管紧张素转化酶(Angiotensincon—vettingenzy

7、me，ACE；EC．3．4．15．1)是一种膜结合二肽羧基酶，广泛存在于哺乳动物的各组织器官中，其中以肺毛细血管内皮细胞的含量最高(Binevskieta1．，2003)。ACE在血压平衡调节中发挥重要作用，可将没有活性的十肽血管紧张素I(AngI)转换为具有增加血管压力的八肽血管紧张素II(AngII)(Andajar—S6nchezeta1．，2004)，使血管平滑肌收缩，迅速引起升压效应，同时使降低血压的缓激肽失活