饲用转基因豆粕对牛奶营养成分的影响及奶中外源基因转移检测.pdf

《饲用转基因豆粕对牛奶营养成分的影响及奶中外源基因转移检测.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、山东畜牧兽医2014年第35卷饲用转基因豆粕对牛奶营养成分的影响及奶中外源基因转移检测史雪萍毕慧娟周茜刘斌王述柏(青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109)摘要随机选择青岛市周边7个奶牛场，，取精料和牛奶样品，检测精料的水分、粗蛋白、粗纤维、粗灰分、钙和总磷含量及牛奶干物质、粗蛋白和钙含量，采取荧光定量PCR法检测精料及牛奶中的豆粕外源基因。结果表明：7个牛场奶牛精料的常规营养成分水分、粗灰分、钙、总磷含量差异显著(P<0．05)，精料粗蛋白质、粗纤维含量、牛奶中的干物质、粗蛋白质和钙含量7个牛场之间差异不显著(P>0．05)。4个牛场精料

2、中含转基因豆粕GTS40．3．2和2704g~系外源基因，3个牛场精料中含转基因豆粕GTS40．3．2品系外源基因。牛奶中均未检测到相应外源基因。可见，饲用不同种类转基因豆粕精料对牛奶主要营养成分含量无显著影响，豆粕外源基因未向牛奶中转移。关键词转基因豆粕外源基因牛奶中图分类号：$816．46文献标识码：A文章编号：1007．1733(2014)08-0004-02近年来我国大豆进口总量迅速增长，进口品种主要1．3．2奶牛精料和牛奶中外源基因检测奶牛精料DNA为转基因大豆。虽然我国还没有批准任何转基因大豆品提取方法：采用GenoDNAPlant

3、MiniKitGenomicDNA系进行商业化种植，但我国已经成为转基因大豆的使用Isolationkit试剂盒(Ambiogen安比奥生物科技有限公司，与消费大国【”。饲料安全是动物源性食品安全的重要影响中国)提取精料DNA，采取荧光定量PCR法检测牛奶和牛因素，随着转基因饲料的广泛应用，转基因饲料安全成精料中外源基因。核酸质量检测：分别取401．dDNA溶解为饲料质量安全的重要组成部分【。转基因饲料外源基因液，用TE缓冲液稀释25倍后，用紫外分光光度计测其在在动物体内如何代谢是很多学者关注的问题，对饲用转A260，A280nm波长处的光吸收

4、值。精料DNA和牛奶基因饲料畜禽的产品质量及外源基因转移检测是评价转DNA纯度以OD260／280表示，A260／A280值分别为1．92和基因饲料饲用安全性的检测指标之一。本试验随机选择71．80，均大于1．70(比值在1．7~2．0之间较好)，符合PCR检个奶牛场，检测精料外源基因种类并分析其营养成分，测要求。外源基因检测：采用实时荧光PCR仪检测提取同时检测了牛奶中的主要营养成分，旨在为转基因饲料核酸的外源基因。反应条件：在96孔PCR反应板的反应安全性评价体系的建立提供数据参考。孔中，依次加入2．51al10xPCR缓冲液，2．0“l4

5、xdNTP(2．51材料与方法mmol／L)，0．5ul20pmol／~tl弓I物F，O．51．tl20pmol／~tl弓l物1．1材料随机选择青岛周边7个奶牛场，每个牛场采集R，0．2B1TaqDNA聚合酶(5U／~1)，2．OlalMgC12(25mmol／奶牛精料4份，牛奶样品5份(取自5头牛)，牛场分别编号L)，O．5~2．0l(150ng)DNA模板，0．51al20pmol／~tl探针，为1、2、3、4、5、6、7。加入去离子水使反应体积达~lJ251al。PCR反应的设置为1．2主要仪器设备台式离心机(Eppendorf5810R

6、，95℃，10min；95℃，5s；60℃，60s进行45个循环。Germany)、实时荧光定量PCR仪(Mastercyclerealplex4，2结果及分析Eppendorc德国)、微量移液器(EppendorfResearch，2．1奶牛精料中营养成分含量Eppendorf,德国)、分光光度计(BioPhotometerplus，7个牛场奶牛精料的常规营养成分含量见表1。Eppendorf,德国)、KDN．120C凯氏定氮仪(上海纤检仪器表1奶牛精料的常规营养成分含量(％)有限公司)等。牛场水分粗蛋白质粗纤维粗灰分钙总磷1．3检测指标与方

7、法18．95~013419．05~0．228．57+0．268．94-4-0．291．544-0．230．64i-0．0929．26~0_32l8．67-4-0-357．87~0．259．15+0_3O0．96~0．14。0．73+0．1l1．3．1奶牛精料和牛奶营养成分含量测定主要检测奶37．37+0．2519．14~0．248．264-0．137．28~0．551．47~-0．10．53~0．13牛精料中的水分、粗蛋白、粗纤维、粗灰分、钙和总磷48．17士0．21”2O．09~0．417．25~0．158．26a：0．161．42-+0．0

8、90．69±O．08含量，水分的测定参照GB6435．86，粗蛋白质的测定参照510．2l士o．2819．87~0．2O8．31~0．189．13士0