青蒿截疟组合物与牛血清白蛋白的相互作用.pdf

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1、Vo1．35高等学校化学学报No．22014年2月CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES309～313doi：10．7503／cjcu20130748青蒿截疟组合物与牛血清白蛋白的相互作用王满元，张超，李静，李朝霞，龚慕辛(首都医科大学中医药学院，北京100069)摘要利用荧光光谱法研究青蒿截疟组合物(青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸与东莨菪内酯质量比为1：1：1：1的混合体系，AAAS)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用．结果表明，与青蒿素单独作用相比，AAAS对BSA

2、的荧光猝灭作用增强，并以静态猝灭为主；计算了298，303和310K下的结合常数、结合位点数和热力学参数，表明AAAS与BSA之间具有较强的静电引力，相互作用过程是一个熵增加的自发分子间作用过程．AAAS对BSA的猝灭常数和结合常数均增大．结果表明，AAAS显著增加了青蒿素与血清白蛋白的结合作用，此过程可能是AAAS增加青蒿素抗疟疗效的重要体内环节．关键词青蒿素；截疟组合物；牛血清白蛋白；荧光光谱；药物相互作用中图分类号Q512．1；o641．3；0657．34文献标志码A疟疾是世界上虫媒传染病中

3、发病率和死亡率最高的疾病之一，给人类带来极大的危害．根据世界卫生组织(WHO)数据，2010年全球仍有2亿多人罹患疟疾，其中至少65．5万人死于疟疾⋯．青蒿素(ART)是从菊科植物黄花蒿Aretemisia口肌口L．中提取出来的有效抗疟成分，青蒿素类药物在疟疾治疗中起着重要作用．为了提高青蒿素类药物的疗效，降低复发率，延缓耐药性的产生，基于青蒿素类抗疟药的联合治疗方案(ACTs)被WHO推荐为疟疾治疗的一线药物，治愈率可达90％以上J．一旦疟原虫对目前的ACTs产生抗药性，疟疾将面临无药可治的困境

4、，因此寻找新型抗疟药物的研究非常紧迫．与化学合成药物相比，寄生虫不易对以中药为代表的天然药物产生抗药性．青蒿多组分配伍抗疟研究结果表明，青蒿乙素(ARTB)、青蒿酸(ARTC)和东莨菪内酯(SCP)仅有微弱的截疟功效．ART分别与ARTB，ARTC和SCP单独配伍后并未显示明显增效作用，而4种组分以质量比l：1：1：1配伍的组合物(AAAS)在鼠疟模型中可以达到相当于青蒿素单独给药时4倍剂量的药效，因此AAAS体系显著增强了青蒿素的抗疟活性J．为了进一步明确AAAS的增效机制，需要进一步开展药物相

5、互作用研究．血清白蛋白是血浆中重要的运输载体，药物进入体内后，通过血浆中血清蛋白的储存和运输发生药理作用]．药物与血清白蛋白的结合作用影响药物的分布、转运、储存、代谢、药效及毒副作用等]．研究ARTB，ARTC，SCP对ART与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的影响有助于阐明生物大分子与小分子配体相互作用的化学本质．本文应用荧光法研究ART，ARTB，ARTC，SCP及AAAS与BSA的结合反应，计算了反应的结合常数及结合位点数，根据热力学参数确定了作用力类型．1实验部分1．1试剂与仪器青蒿素(AR

6、T)、青蒿乙素(ARTB)和青蒿酸(ARTC)参照文献[8]方法制备；东莨菪内酯(SCP)，Et本东京化成工业株式会社；牛血清白蛋白(BSA)，美国Sigma-Aldrich公司；实验用水为二次去离子蒸馏水；其它试剂均为分析纯．收稿日期：2013-08-03．基金项目：国家自然科学基金(批准号：81102752)、北京市自然科学基金(批准号：2112010)和北京市属高等学校高层次人才引进与培养计划项目(批准号：cm妍cD2O1304184)资助．联系人简介：王满元，男，博士，副教授，主要从事中药

7、活性成分及炮制原理研究．E·mail：wangmyjun@aliyun．com龚慕辛，女，博士，教授，博士生导师，主要从事中药制剂研究．E—mail：gongmuxin@126．eom310高等学校化学学报F-2500型荧光分光光度计(日本Hitachi公司)；TB．85恒温水浴装置(日本Shimadzu公司)．1．2实验方法以Tris—HC1缓冲溶液(pH=7．4，内含0．10mol／LNaC1以维持离子强度)为溶剂将BSA配成1．0~mol／L的标准溶液备用；将ART，ARTB，ARTC和SC

8、P用无水乙醇分别配成0．25mmol／L的标准溶液备用；将ART，ARTB，ARTC和SCP用无水乙醇配成每种药物浓度为0．25mmol／L的混合标准溶液备用．在荧光比色皿中加入3mL浓度为1~mol／L的BSA溶液，然后用微量移液器滴加3L药物溶液，混匀，放置5min，设定激发波长为280nm，激发和发射狭缝宽度均为5nm，分别测定样品在298，303和310K时在300～450nm波长范围内的荧光发射光谱．在荧光比色皿中继续滴加3药物溶液，再分别测定荧光发射光谱，共累积滴加体积