酶法辅助提取迷迭香中主要活性成分研究.pdf

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1、IJ研究园地酶法辅助提取迷迭香中主要活性成分研究木郭然．梁待亮(中山百灵生物技术有限公司，广东中山528437)摘要：迷迭香原料采用纤维素酶酶解后，再对其主要抗氧化活性成分进行提取，并以鼠尾草酸、鼠尾草酚含量作为衡量工艺的主要指标，以提取物中的鼠尾草酸重量作为衡量工艺参数的优劣。采用L9(4)正交试验考察酶解时间、酶解温度、pH值、酶用量对产品得率等因素的影响。通过正交试验发现：酶用量()．2％、pH值为4、酶解温度为35~40~C、酶解时间4h，产品得率最高。关键词：迷迭香；纤维素酶；鼠尾草酸；鼠尾草酚；活性成分迷迭香(P,．osmarinuso~cinalisL．)，

2、属唇形科迷迭香属多年2．3酶法辅助提取的正交试验设计生常绿植物Ⅲ。原产地中海地区，1981年由中科院植物所引种通过初步对酶解试验的摸索，拟定了酶解中四个影响因素成功，目前已在我国贵州、云南、浙江、湖南等省广泛种植]。迷的正交试验方案(见表1)，并通过2．2提取方法进行提取，测定迭香可以提取香料外，还富含多种的抗氧化成分，能有效清除提取物的收率及质量情况。体内自由基，具有消炎、抗肿瘤、抗艾滋病毒等功效。表1因素水平表迷迭香中脂溶性抗氧化成分中含量最高、活性最强的属鼠童pH温度(℃)时间(h)酶量(％)尾草酸和鼠尾草酚]。但其含量低．且在溶液中特别高温时很16402O．1容易

3、被氧化．所以采用耗时较长的溶剂浸提法和升温提取均可2535402343060．4能破坏其中活性成分。纤维素为植物细胞壁的主要结构，活性成分大多数被包裹在细胞壁内，如果采用纤维素酶对迷迭香植2．4活性成分检测的色谱条件物中细胞壁进行处理后．能使细胞壁破裂，有助于活性物质的色谱条件：色谱柱CAPCELLPAKC18，流动相：乙腈-0．05％溶出．从而能够提高收率和质量。酶解辅助提取方法对环境友三氟乙酸(75：25)；检测波长230nm；柱温：30oC；流速lml／min。好．易于工业化生产。3试验结果与讨论1试验材料与方法根据正交试验设计和提取工艺对迷迭香中活性成分进行1．1

4、试验材料提取．所提取的提取物中鼠尾草酸和鼠尾草酚成分的重量见表2，迷迭香草湖南南县种植以鼠尾草酸重量结果为参考，对正交试验进行分析，4因素影响鼠1．2主要仪器尾草酸提取的程度依次是：pH值>时间>酶用量>温度。从结果高效液相色谱仪LC一20A日本岛津来看，pH=4为最佳酶解pH；温度在35~40℃较为合适；酶解时旋转蒸发仪RE-52AA型上海亚荣生化仪器厂间4h达到峰值，随后下降，可能是鼠尾草酸在溶液中不稳定，鼓风干燥箱GRX6上海精宏实验设备有限公司长时间导致分解的原因；而酶用量上，随着用量增大，提取的鼠1．3试剂尾草酸量越大，但0．2％与0．4％的结果几乎无差别，考虑

5、到生产纤维素酶(酶活≥1万U／g)阿拉丁试剂成本，0．2％酶用量较为合适。所以，最佳酶解条件为：pH=4、35~鼠尾草酸Sigma公司4O℃、酶解4h，最佳酶用量为0．2％。鼠尾草酚Sigma公司表2试验方案与结果甲醇广州试剂厂序号pH温度(℃)时间(h)酶量(％)鼠尾草酸(g)鼠尾草酚(g)15302O．1O98O21石油醚(60~90℃)广州试剂厂25354O．2165O．312试验与方法35406041-25O_252．1酶法辅助提取工艺443040．41．82036称取100g迷迭香干草于提取罐中，将纤维素酶溶于一定54356O11．43O．3164402O．21

6、76O39pH值的水并投入人提取罐中，缓慢搅拌下用水浴调整罐内溶73306O．21．O2O．21液温度，进行酶解实验。8335204138O232．2活性成分提取工艺93404O．11．34O．22将迷迭香草酶解完后，过滤，沥干水分。加人八倍量甲醇，kl1．2931．27313731．250强力搅拌提取2h，过滤，滤渣用5倍甲醇再提取一次，过滤，滤k21．6701．48716031．477液合并，减压蒸去溶剂，加入1O倍石油醚提取，过滤，滤液减压k31．2471．4501．2331483R0．4230．2140．3700233浓缩至原体积的1／5，冷却至15+3~(7析晶

7、30min，过滤，干燥，即得迷迭香提取物。(下转第238页)基金项目：2010年广东省建设现代产业体系技术创新滚动项目专项“高纯度迷迭香提取物关键技术研究和产业化”(20101022057)广东科技20147第14期227I1研究园地且培训的内容不用太深奥，简单易懂即可，比如说基本的电子在老年读者的群体中，大部分都期望获得完全的尊重，所文献的查阅、互联网信息的查询、多媒体资料的查阅、收发邮件以县级公共图书馆也应该充分满足老年读者被尊重的心理，除等等。了对他们提供耐心的服务之外，还应该学会倾听他们的需求与2．3完善图书馆的服务体