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1、佛波酯对体外培养大鼠前庭上皮PKC表达的影响作者：孙景豫黄维国王锦玲邱建华姜鸿彦【关键词】毛细胞关键词：毛细胞，前庭;蛋白激酶C;器官培养;佛波酯摘要：冃的观察体外培养条件下蛋白激酶c(proteinki-naseC,PKC)在佛波酯(phogrbol12-myristate13-acetate,PMA)诱导下大鼠前庭上皮的表达和分布特点.方法取新生大鼠椭圆囊，建立体外前庭器官培养模型，采用免疫组织细胞化学的方法，以PKCB,Y抗体为标记物，检测PMA诱导后前庭上皮PKCB,Y的表达变化和分布特点.结果PKCB,y在止常培养新生大鼠前庭上皮细胞的细胞
2、膜及细胞质中有弱表达.PMA作用后，其表达逐渐增多，PKCP1主要位于细胞膜,在30min时表达最强，其后逐渐减少,45min仍高于正常(P<0.01).PKCP2不但位于细胞膜，而且在纤毛亦明显表达;PKCy在PW诱导后胞质表达增加•在毛细胞层和支持细胞层均有,主要位于毛细胞层.结论体外前庭器官培养在PMA诱导后，PKC各亚型激活的形式及程度不同.Keywords:haircel1s,vestibular;proteinkinaseC:organculture;phogrbol12-myristate13~acetateAbstract:A
3、IMToinvestigatetheexpressionofPKC3,YofvestibularepitheliuminratsafterPMAtreatmentduringor-gancultureinvitrosoastoelucidatethebiologicalcharacter.METHODSThevestibularorganwasplacedinthebottomofacultureplatewhichcontainedculturemediumtogrow・Aftertheinitialcultureperiodof24h,theex
4、plantwasincu-batedwithPMAfordifferentperiodsoftime.Theexpres-sionsofPKC31,02,andPKCYweredeterminedbyanti-PKC01,02,andPKCYwithimmunocytochemistry.RESULTSInthenormalculturedvestibularepitheliumofnewbornrats,the1evelsofexpressionofPKCwerelowinthecontrolgroups・Intheexperimentalgrou
5、ps,PKClevelswereelevat-edsignificantlyandincreasedtothepeakat30minutes.Thenthe1evelsdecreasedgradual1y,butat45minutestheywerestillincreasingcomparedwiththenorma].PKCPstainingwasdetectedincel1membranes,PKCB2,notonlystainedincellmembranesbutalsoincilia.,PKCYstainingincreasedincel
6、lcytoplasm.CONCLUSIONDuringorgancultureinvit~ro,theexpressionsof卩KCB,YofvestibularepitheliuminratsafterPMAtreatmentincreased,whichsuggeststhattheiso-formofPKCmayhavedifferentformsofanddifferentactiva~tion,isoformmayfunctiondifferently.0引言蛋白激酶C（proteinkinaseC,PKC）是一类钙离子-磷脂依赖性的蛋白
7、激酶，在跨膜信号转导过程中起着十分重要的作用，其通过催化多种蛋白质上的ser/thr磷酸化调节细胞代谢、增殖、凋亡及分化•研究表明PMA可以刺激心肌细胞增殖［1］；能激活Raf-1-MEK-MAPK信号转导途径，引起ERK-2表达增加、细胞增殖［2］・我们在建立体外前庭器官培养模型的基础上，采用免疫组织细胞化学的方法，以PKC3,Y抗体为标记物，检测在PKC活化剂佛波酯（Phor-bol12-myristatel3-acetate,PMA）诱导后前庭上皮PKCB,y的表达变化和分布特点，以探讨pkc在内耳的生物学特性及意义.1材料和方法1.1材料新生
8、2d的SD大鼠20只•雌雄不限，体质量（9.1±1.3）g,由第四军医大学实验动物中心提供.PKC31,2,
