细胞动物组织基因组dna纯化方法

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1、美好明日美好未来http://www.biofuture.cn细胞/动物组织基因组DNA纯化方法1.细胞基因组DNA提取方法1.贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。2.细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。3.重复2。4.加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。5.加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀，50℃水浴3h,6.用等体积的酚抽提一次，2500r/min离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相。用等体积的氯仿，异戊

2、醇抽提一次。7.加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀，冰浴，10min.8.2500r/min,离心10min.转上清与一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10分钟。9.2500r/min,离心10min。弃上清。加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20分钟。10.12000r/min,室温离心5分钟。弃上清。将DNA溶于适量TE中。2.动物组织基因组DNA提取方法在许多DNA研究工作中，需要直接从新鲜或冻存的动物组织（如肝、脑、肺、鼠尾等）中制备高分子量DNA。与提取细胞基因组DNA相似，操作前应确定需

3、处理的动物组织样品最大量，以免造成组织裂解不彻底及DNA得量和纯度的下降。与培养细胞相比，从动物组织制备DNA更为困难。动物组织难以破碎，用一般匀浆方法捣碎组织容易引起DNA断裂，而且时间比较长，在此期间DNA可能会被DNA酶降解，因此用一般方法难以从动物组织中大量制备高分子质量的基因组DNA。2.1操作步骤:1.切取组织5g左右，剔除结缔组织，吸水纸吸干血液，剪碎放入研钵(越细越好)。Notice：常规动物组织样品的处理方式和注意事项新鲜组织：刚刚离体的新鲜动物组织25mg（小鼠尾0.6-1.2cm，大鼠尾0.6cm）用剪刀剪切成小块，移入预冷的研钵或匀浆器

4、中，快速、用力研磨或匀浆冻存组织：不能立刻提取DNA的组织样品应置于液氮或-70度冰箱中保存并避免反复冻融。取出冻存样品，放入预冷的研钵或匀浆器中，加入少许液氮快速、用力研磨成粉末状。需要特别注意的部分组织样品：某些组织样品因匀浆比较困难或匀浆过程中DNA容易降解，建议无论新鲜组织，还是冷冻保存的样品，都应按照冻存组织样品的处理方式进行2.倒入液氮，磨成粉末，加10ml分离缓冲液。3.加1ml10%SDS，混匀，此时样品变得很粘稠。4.加50ul或1mg蛋白酶K，37℃保温1-2小时，直到组织完全解体。5.加1ml5mol/LNaCl，混匀，5000rpm离心

5、数秒钟。6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后,3000rpm离心5分钟。7.取上层水相至干净离心管，加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。8.移去上层乙醚,保留下层水相。9.加1/10体积3mol/LNaAc，及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。北京明日百傲生物科技发展研究所010-6282526862819319美好明日美好未来http://www.biofuture.cn10.用玻棒钩出DNA沉淀，70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干，溶解于1mlTE中，-2

6、0℃保存。11.如果DNA溶液中有不溶解颗粒，可在5000rpm短暂离心，取上清；如要除去其中的RNA，可加5μlRNaseA(10μg/μl)，37℃保温30分钟，用酚抽提后，按步骤9-10重沉淀DNA。明日百傲衷心期望能与您合作双赢！美好明日美好未来北京明日百傲生物科技发展研究所010-6282526862819319