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时间:2017-12-08
《犬源伪狂犬病病毒的分离鉴定及其主要毒力基因分子特征分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、犬源伪狂犬病病毒的分离鉴定及其主要毒力基因分子特征分析12111吴发兴,邹 敏,董雅琴,刘 爽,李晓成(1.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032;2.青岛易邦生物工程有限公司,山东青岛 266114)摘 要:对发生临床疑似伪狂犬病毒(PRV)感染的牧羊犬组织样品,进行研磨、细胞接种、传代培养、细胞病变效应(CPE)观察、PCR检测、效价测定、电镜观察、IFA检测、家兔接种以及基因测序分析等,结果成功分离到1株犬源PRV毒株,命名为XJ-14株。该毒株可致PK-15细胞产生变圆、破碎、逐渐呈拉网式漂浮等-7.
2、45特征性细胞病变;PRVgE-PCR检测阳性,病毒效价达10/0.1mL;病毒粒子在电镜下呈圆形,有囊膜,直径约150nm;PRV荧光抗体检测阳性,接种家兔后可致家兔奇痒、麻痹死亡。对该毒株gC、gE、TK基因进行全基因测序,发现gE糖蛋白的48、497位各插入了1个D,另有12个氨基酸位点发生点突变,其gC蛋白氨基酸序列64~70位出现了7个氨基酸(AASTPAA)插入。结果表明,此牧羊犬病例是由PRV感染所致。关键词:犬;伪狂犬病病毒;XJ-14株;分离鉴定;毒力基因中图分类号:S851.3 文献标识码:A 文
3、章编号:1005-944X(2017)09-0096-06DOI:10.3969/j.issn.1005-944X.2017.09.026Isolation,IdentificationandtheMajorVirulenceGenesCharacteristicAnalysisofPseudorabiesVirusfromCanine12111WuFaxing,ZouMin,DongYaqin,LiuShuang,LiXiaocheng(1.ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter,
4、Qingdao,Shandong266032;2.QingdaoYebioBioengineeringCo.,Ltd.,Qingdao,Shandong266114)Abstract:TissuesamplesfromasheepdoginfectedwithclinicallysuspectedPseudorabiesvirus(PRV)wereidentifiedbygrinding,cellculture,subculture,CPEobservation,PCRdetection,virustiterdetermi
5、nation,electronmicroscopeobservation,IFAassay,rabbitinoculationtestgenesequencingandanalysis.Asaresult,onePRVstrainwasisolatedfromdogsuccessfully,namedXJ-14strain.TheisolatewasabletocausetypicalCPEinPK-15cells,characterizedby-7.45round,broken,cellmeshandfloating.T
6、heresultofPRVgE-PCRwaspositive,withthevirustiterof10/0.1mL.Thevirusparticleswereround,withenvelope,diameterabout150nmundertheelectronmicroscope.ThereactionwithPRVfluorescentantibodywaspositive.AfterchallengingtheXJ-14isolate,therabbitsappeareditching,paralysisandd
7、eath.Themajorvirulencegenes,suchasgE,TKandgCgeneweresequencedandanalyzed.TheresultsshowedthattwoAspwereinsertedinthegEglycoprotein48and497aminoacidsite,respectively.Andtherewere12aminoacidsitesmutation.ForthegCglycoproteinsequence,therewere7aminoacidsinsertion(AA
8、STPAA)inthe64~70aminoacidsites.AlltheresultsshowedthatthedogcasewascausedbyPRV.Keywords:canine;Pseudorabiesvirus;XJ-14strain;isolationandidentification;virulenc
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