血清双向电泳样品制备技术的优化及应用.pdf

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1、第四军医大学学报（JFourthMiIMedUniv）2006；27（21）http：//journaI.fmmu.edu.cn·经验交流·文章编号：1000-2790（2006）21-封3-01步骤后，我们对两组图像中的蛋白质点分布进行比较分析，在不同的区域可以观察到两种方法有显著的蛋白质点分布差血清双向电泳样品制备技术的优化及异.将这些区域放大后箭头所指清楚标识两种方法导致的差异蛋白质点.应用$"讨论"SDS法是一种经典的体液样品处理方法，在2-DE11211赵亮，李欣，李雪华，丁彦青（南方医科大学前应尽可能的去除脂类和盐类，减少SDS的负面效应，提取液2南方医院病理科，广东广

2、州510515，武警医学院病理学教研中SDS的浓度要控制在0.25%w/v以内，而样品的蛋白浓度室，天津300162）较低时则不适于以热SDS法进行2-DE样品制备，由此可见，热SDS法是最适合于作为血清样品2-DE的处理方法，增加溶【关键词】人血清蛋白质；样品制备；双向电泳；蛋白质组［2］解，除去2-DE干扰物才能获得准确和重复性好的结果.Joo【中图号】R730.3【文献标识码】B［3］等就体液2-DE样品制备方法做了系统的比较，文中我们提到处理血清样品推荐采用热SDS法可以增加蛋白的分离效果!"材料和方法"取2.5!L血清（约200!g）与含SDS和DTT而检测到了更多的蛋白

3、质点.也有不少学者采取了直接溶解的缓冲液混合，在95C下加热5min，待冷却后用上样缓冲液［4］法进行双向电泳，Chen等对严重急性呼吸器官综合症（含7moI/L尿素，2moI/L硫脲，40moI/LCHAPS，65mmoI/L（SARS）进行血浆蛋白质组研究，发现血浆过氧化物酶"在DTT和5moI/LIPGbuffer）稀释至350!L；取2.5!L血清直SARS患者血浆中水平增高.接与347.5!L的上样缓冲液混合.筛选5例大肠癌血清标本实验我们系统的比较了经典的热SDS法与直接溶解法本，按等质量混合，分别利用直接溶解和热SDS法处理血清样进行双向电泳的差异及效果，为血清蛋白质

4、组2-DE研究样品品，2-DE主要参照文献［1］和Bio-Rad仪器操作手册进行，实处理方法奠定基础.实验发现热SDS法可以明显改善双向电验重复三次，银染后凝胶通过UMAXPowerLook1100投射扫泳的分离效果，局部图谱比较可清楚的看到热SDS法比直接描仪进行扫描，利用MeIanie4对图像进行分析.溶解法获得更多的蛋白质点，而且蛋白表达丰度普遍增高，损失蛋白较少，在此基础上建立了分辨率较高且重复性好的人#"结果"应用热SDS法处理血清样品银染显示蛋白质点染大肠癌血清蛋白质双向凝胶电泳图谱，为肿瘤血清蛋白质组色深，蛋白质点分散清楚，而直接溶解法处理样品蛋白质点染学分析奠定了基

5、础.色浅，局部蛋白质点不分散，发生融合.表明热SDS法丢失较少蛋白质，进行双向电泳可获得高质量的2-DE凝胶图谱.采【参考文献】用MeIanie4分析软件对直接溶解法与热SDS法2-DE图谱进［1］李雪华，李欣，许守军，等.血清蛋白质组学研究中白蛋白和行点检测，两种方法所得蛋白质点数分别平均为为675146IgG去除方法的建立与评价［J］.第一军医大学学报，2004，和702149，平均匹配点数为573142和623152，匹配率为24（11）：1233-1235.85.3%和89.6%，分析三块不同胶间蛋白质点在IEF方向的［2］HerbertB.Advancesinprotei

6、nsoIubiIisationfortwo-dimensionaIeIectrophoresi［sJ］.EIectrophoresis，1999，20（4-5）：660-663.位置偏差为（0.8510.30）mm和（0.8110.28）mm，在SDS-［3］JooWA，LeeDY，KimCW.DeveIopmentofaneffectivesampIePAGE方向上的偏差为（1.0210.18）mm和（0.9710.12）preparationmethodfortheproteomeanaIysisofbodyfIuidsusing2-Dmm.由此可见利用热SDS法处理血清样品可

7、以得到更多的geIeIectrophoresi［sJ］.BiosciBiotechnoIBiochem，2003，67（7）：蛋白质点，且重复性较好.经过重叠处理、人工识别及校准等1574-1577.收稿日期：2005-09-14；接受日期：2005-11-07［4］ChenJH，ChangYW，YaoCW，etaI.PIasmaproteomeofsevereacuterespiratorysyndromeanaIyzedbytwo-dimensionaIgeIeI