电镜样品制备技术的应用

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1、电镜样品制备技术的应用作者：陶忠芬，江海东，李飞，路菊，可金星【关键词】电镜样品；制备；咨询随着科技和经济的高速发展，科研、医疗及诊断水平快速提高，电子显微镜在现代生物医学研究中的应用越来越广泛，研究内容越来越丰富，针对性越来越强，加之生物样品多样化，对电镜样品制备技术提出了更多更高的要求。为了避免实验的盲目性，避免因解释不够、实验准备不充分、操作不当引起的纠纷，减少实验的失败率，务必要抓好电镜样品制备技术。1电镜样品制备的基本要求首先根据实验的需要，拟定实验计划，制定出实验流程，根据经济承受能力合理选择实验分组和时相点。其次，正确取材腹腔镜下贲门食管区局部解

2、剖的临床意义很关键：取材固定要快，必须在固定液中及时修小。固定液由电镜室提供，不能自己配制（特殊标本除外）。标本保存在4℃冰箱，不得冰冻。样品处理步骤多而复杂，耗时长，所以要预计镜下观察结果的时间，便于安排实验。2特殊电镜样品的制备方法4针对不同的实验目的，不同的标本取材，寻求不同的电镜样品制备方法。作者经过长期的实验反复摸索，得到许多有应用价值的新技术、新方法，为有类似课题研究的科研人员的电镜技术咨询提供理论依据。例如要观察组织细胞中的钙，只有采用钙离子捕捉法，通过细胞化学间接地来进行钙的定位［1］。为了促进组织细胞内钙化学充分反应，就如何选择底物、捕捉剂、

3、如何配制试剂和灌注固定等进行摸索，得到有效的、可行的电镜样品制备方法，可供参考。如果要观察培养细胞间连接，建议采用改进的薄膜细胞培养法，优势在于细胞超微结构保存良好，能保持细胞间原有的位置关系，利于反复切片，解决了单层培养细胞顶扣包埋后切片难、成功率低的问题［2］。悬浮细胞培养，悬浮物质作为悬浮细胞生长载体是近年组织工程研究的新方法，如何观察悬浮细胞生长状态的真实超微结构图像是电镜制样的新课题。改进的悬浮细胞直接沉降法和悬浮物质直接移液法，解决了传统的悬浮细胞扫描电镜制样细胞和物质容易丢失、细胞表面特殊微细结构保存不好的问题［3］。电镜免疫技术应用越来越广泛，

4、但制样复杂，影响因素多，阳性率低。在样品制备技术咨询时，根据实验要求和不同的组织细胞，不断查阅文献，共同探讨，合理选择标记物、固定液、免疫染色和电子染色等，使免疫电镜技术不断提高，逐步成熟，为科研快速发展奠定基础。3利用电镜技术用户资源提供技术咨询电镜室是为科研人员服务4的，是设备和专业技术力量较集中的单位。为了提高创新能力，扩大交流合作，加强校内外信息沟通，与科研人员共同建立了电镜技术用户资源共享平台，提供相关的技术咨询服务。建立电镜技术用户资源库，详细记录了用户名、实验日期、实验目的、标本类型、制样步骤和方法、实验结果、所在单位和联系电话等，相关科研人员只

5、需采取简单而灵活的电话咨询或发邮件等方式进行技术经验交流，包括试剂的购买厂家或贵重试剂合用，试剂的配制，实验流程，标本处理方法，实验操作中的改进措施，实验结果的分析等。实践证明，实验前通过用户与电镜专业技术人员、用户与用户之间的电镜技术咨询，相互借鉴，共同探讨，促进了科研人员之间的交流与合作，扩大了宣传。实验成功的技术方法和理论成果被广泛推广应用，电镜技术不断被刷新，积累了许多有应用价值的电镜样品制备经验，丰富了形态学研究的内容。科研的成功在于把关每个环节，对于形态学研究要认真对待电镜样品制备技术的咨询，明确方向，拟订实验方案，不断创新并解决技术难题，才能使超

6、微结构研究取得突破性进展，适应现代医学的发展。【参考文献】［1］陶忠芬，李文刚，等.大鼠膀胱平滑肌过度充盈后钙离子分布的变化［J］.第三军医大学学报，2006，28(6)：608-609.［2］4赵娟，徐淑梅.一种淀粉样蛋白电镜标本制备的新方法［J］.天津医药，2007，35（4）：287-288.［3］路菊,陶忠芬,等.悬浮状物质的样品制备及扫描电镜观察［J］.第三军医大学学报,2007，29(4)：368-369.4