大豆秸杆粗纤维分解菌的分离和鉴定-论文.pdf

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1、中国饲料2013年第12期大豆稿秆租歼维分解菌的分离和鉴定东北农业大学动物科学技术学院蓑辜孙东峰『摘要1试验采用稀释平板法分离瘤胃细菌，通过刚果红平板法初筛和大豆秸秆遥瓶复筛，从奶牛瘤胃内容物中分离筛选一株能高效分解大豆秸秆粗纤维的菌株。结果表明，该菌株的分解能力强，可使大豆秸秆中NDF从86．86％下降至77．43％．ADF从58．60％T降至46．15％。对该茵株进行初步鉴定和培养条件优化结果表明，该菌株为革兰氏阴性无芽孢杆菌．培养时间37℃、培养温度60h、接种量10％、氮源添加量4％为该茵最适产酶

2、条件。『关键词1大豆秸秆；粗纤维；分离；鉴定[中图分类号】$816．3[文献标识码】A[文章编号]1004—3314(2013)12—0018—02『Abstract1InoMertoscreenoutbacteriathatcoulddecomposessoybeanstrawcrudefibereficientlyfromrumenflu—id，themethodsadoptedthattrialseparationoflumenbacteriabythedilutionplateandCongore

3、dmediumplatemethod，andsoybeanstrawflaskshakingfermentationmethod．Theresultsshowedthat：thestraincoulddecomposesoybeanstraw，anditcouldmaketheNDFofsoybeanstrawdecreasefrom86．86％to77．43％andtheADFofsoybeanstrawdecreasefrom58．60％to46．15％．Thonghthepreliminaryide

4、ntificationofstrainsandoptimizationofculturemedium，itwasGram—negativebacillus．Theoptimumconditionsforenzymeproductionwereculturetemperature37℃，culturetime60h，inocu—lation-quantity10％．nitrogensourceaddingquantity4％．[Keywords】soybeanstraw；coamefiber；screeni

5、ng；identi~黑龙江省作为我国大豆主产区，大豆种植面蒸馏水100mL，pH自然。积约占全国的33％，总产量约占全国的37％(唐1．1．2溶液0．2mol／L磷酸缓冲液(pH=6．0)，庆春，2011)，大豆秸秆资源十分丰富。大豆秸杆直0．5％羧甲基纤维素钠底物溶液，0．5％微晶纤维素接作为饲料，营养价值较低。故本试验以大豆秸秆底物悬浮液．0．5％水杨苷底物溶液，0．5％木聚糖为原料，从奶牛瘤胃液中分离、筛选出一株对大豆底物溶液，DNS溶液，葡糖糖标准使用液，木糖标秸秆中纤维素高效分解的菌株，为大豆秸

6、秆资源准使用液，纤维素酶液。的高效利用提供理论依据。1．2方法1材料与方法1．2．1瘤胃液采集东北农业大学实验基地健康1．1材料的、带有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛4头，以切1．1．1培养基富集培养基(100mL)：羧甲基纤碎的大豆秸秆为粗饲料，预饲18d。第19天晨饲维素钠(CMC—Na)1．0g，K2HPO0．1g，MgSO4·后2h分别采集瘤胃液，经四层纱布过滤后放人7H2O0．1g，MnSO45x10g，酵母膏1．0g，蛋白胨保温瓶中，迅速通入CO：并返回实验室。1．0g，蒸馏水100mL，pH6．

7、8左右。1．2．2分解菌的筛选分离筛选培养基(100mL)：羧甲基纤维素钠1．2．2．1菌株初筛取1mL瘤胃液至富集培养(CMC—Na)0．5g，NAN030．3g，K2HP040．1g，MgSO4基中，厌氧培养20h。取1mL富集培养液逐级稀0．05g，琼脂1．7g，蒸馏水100mL，pH6．8左右。释至10、10、l0。涂布于筛选培养皿中，37℃恒大豆秸秆培养基(100mL)：大豆秸秆粉3g，温厌氧培养20h。分离出生长旺盛，并经刚果红染色、NaC1脱色后能观察到菌落周围有明显的透基金项目：奶牛高产新

8、型调控剂开发与利用(12521032)明水解圈的菌株。通讯作者1．2．2．2菌株复筛取透明水解圈明显且透明圈2013年第12期中国饲料直径／菌株直径大的10株接种于分离筛选培养基2中纯化。分别取10mL培养液接种于大豆秸秆培0养基中，并将培养液涂布于平板培养基中记录每0020406081I214毫升培养液的菌数。培养60h过滤回潮，测定分浓度／(mg，mL)解菌处理后大豆秸秆的中性洗涤纤维和酸性洗涤图1葡萄糖标准曲线纤维。选择