有机磷农药纳米磁珠酶联免疫分析方法研究

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1、胡寅等有机磷农药纳米磁珠酶联免疫分析方法研究有机磷农药纳米磁珠酶联免疫分析方法研究*胡寅沈国清朱鸿林姜官鑫陆贻通(上海交通大学农业与生物学院，农业部都市农业(南方)开放重点实验室，上海200240)摘要将有机磷农药通用抗体固化在自行制备的纳米磁珠表面，以甲醇、丙酮、pH及包被纳米磁珠的抗体稀释度为主要影响因素，依据均匀设计法和间接竞争酶联免疫反应原理，对纳米磁珠酶联免疫分析(EusA)方法进行了优化，并开展了纳米磁珠抗体复合物对多种有机磷农药识别作用的比较研究。结果表明，无论是甲醇还是丙酮，抗体稀释度与溶剂互作对半抑制浓度(IC5o)的影响最大；与传统ELISA相比，纳米磁珠间

2、接竞争ELISA对毒死蜱、喹硫磷、敌百虫、三唑磷、乙拌磷、伏杀磷、对硫磷、敌敌畏和久效磷均有较好的识别作用，Icso为1．29～6．34t~g／mL，比传统ELISA降低了68．3～95．6，灵敏度大大提高。关键词酶联免疫分析纳米磁珠有机磷农药通用抗体Magneticparticle-basedenzymelinkedimmunosorbentassayfordetectionoforganophosphoruspesticideHUY／n．SHENGuoqing，ZHUHonglin，JIANGGuanxin，L【，Yitong．(KeyLaboratoryofUrbanAg

3、riculture(South)，MinistryofAgriculture，SchoolofAgricultureandBiology，ShanghaiJiaoTongUniversity，Shanghai200240)Abstract：Themagneticbeads—basedenzyme1inkedimmunosorbentassay(mb—ELISA)wasestablishedforde—tectionoforgan0ph0sph0ruspesticide．Themagnetichead—antibodycomplexappliedinmb—ELISAwasprep

4、aredbyimmobilizationageneralorganophosphoruspesticides(OPs)antibodyonthesurfaceofmagneticbeads．Theoptimiza—tionofmb-ELISAwasfoundbymeansofuniformdesignwithorganicsolvents，pHandtheconcentrationofantibodyusedforcoatingmagneticbeadsasinfluencefactors．Theresultsshowedthattheinteractionbetweenorg

5、anicsolventsandtheconcentrationofantibodyhadthegreatestimpactonIC50．ComparedwiththeclassicalELISA，thesensitivityofmb—ELISAwasgreatlyenhancedindetectingOPssuchaschlorpyrifos，quinalphos，trichlorfon，triazophosdisulfo—ton，phosalone，parathion，dichlorvosandmon0crotophoswiththeIC5。weredecreasedby68

6、．3一95．6．Keywords：enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)；magneticbeads；organoph0sphoruspesticides；gen—eralantibodjes有机磷农药是一类高效广谱杀虫剂，广泛应用米磁珠在细胞及生物大分子的分离与纯化等领域中在农业和卫生害虫的防治上。由于其在环境中的残的研究引起了国内外的广泛关注]。由于纳米磁珠留风险，研究建立快速、高效的免疫检测技术一直是免疫检测方法的特异性高、操作简便快速，其在免疫国内外的研究热点n]。其中，酶联免疫分析检测中具有巨大的应用前景口]。笔者以有机磷农(EL

7、ISA)在农药残留现场大样本快速筛选中占有独药为研究对象，开展了纳米磁珠制备及其ELISA方特的优势]。然而，传统ELISA追求抗原／抗体识法的研究。别的高度特异性，通常一种抗体只能检测单种农药，1材料和方法难以满足实际检测时一次测定多种农药同时检出的需求_4]。近年来，国内外相继报道了利用宽谱特异1．1药剂和试剂性抗体建立农药ELISA多残留检测方法[5。]，但所毒死蜱、喹硫磷、敌百虫、三唑磷、乙拌磷、伏杀报道的宽谱特异性抗体对不同农药的交叉反应率相磷、对硫磷、敌敌畏、久效磷、乙酰甲胺磷、