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1、伏马毒素B1酶联免疫分析方法研究?182?国外医学卫生学分册2006年第33卷第3期044伏马毒素B酶联免疫分析方法研究权英,王硕,王向红综述(1.天津市"食品营养与安全"重点实验室,天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457;2.河北农业大学食品科技学院,河北保定071001)摘要:伏马毒素B,是由串珠镰刀菌属产生的毒性较大的一种真菌毒素,国内外对检测伏马毒素B,的酶联免疫吸附分析方法进行了许多研究.本文主要对酶联免疫分析中的完全抗原制备,抗体的制备以及酶联免疫检测形式进行概述.关键词:伏马毒素B,;抗原;抗体;酶联
2、免疫分析中图分类号:TS207.4文献标识码:A文章编号:1001.1226(2006)03.0182.05伏马毒素是上世纪80年代末期发现的一类由串珠镰刀菌(Fusariummonilifo肌Sheldon)产生的真菌毒素,主要存在于谷物中,以玉米居多….另外,在以谷物为原料的一些产品中如面条,啤酒,调味品,甚至在芦笋中也检测到了伏马毒素.迄今为止已发现了11种伏马毒素,但主要的并且毒性较大的是伏马毒素B族类(FBs):FB,,FB和F.在自然污染的玉米中,以伏马毒素B,(FB.)量最多,约占伏马毒素总量的70%E31.流行病
3、学调查表明,伏马毒素与马脑白质软化症(1eukoeneephalomalacia,LEM),猪的肺水肿症侯群(pulmonaryedema,PE)以及人类食道癌等人畜疾病有关.另外,伏马毒素还是一种慢性促癌剂,能引起灵长类动物的动脉粥样硬化样改变.目前国际上对食品和动物饲料中伏马毒素的限量及检测方法尚无统一标准.瑞典确定玉米中FB,和FB的最大可接受限量为1mg/kg;美国FDA规定以玉米为原料的食品中FBs的最大限量为2～4mg/kg,动物饲料中为5～100mg/kg.我国对此的相关法规也正在制定中.对伏马毒素的痕量检测,国外
4、已经应用的有薄层色谱法(TLC),高效液相色谱法(HPLC)J,毛细管气相色谱法(Gc),毛细管电泳技术(CE),液质联用(LC/MS)No],气质联用(GC/MS)¨以及酶联免疫吸附试验检测(ELISA)等方法.TLC法在伏马毒素检测中应用较早,但其操作较费时,灵敏度和收稿日期:2005.09.07;修回日期:2006.03.07基金项目:新世纪优秀归国人才资助计划(NECT-04.0243);天津科技大学重点基金(20030103)作者简介:权英,女,在读博士研究生,研究方向:食品安全检测.特异性也较差.仪器检测具有较高的灵
5、敏度,国内外研究与应用较多的是HPLC法,但是仪器分析法的样品前处理过程繁琐,通常需要专业人员进行操作,检测过程耗时且费用较高,不适于大量样品的现场快速检测.ELISA技术自上世纪70年代出现至今,就因其准确性高,特异性高,适用范围宽,检测速度快以及费用低等优点,而在临床和生物疾病诊断与控制等领域备受重视.由于ELISA的技术条件要求低,携带方便,常以试剂盒的形式出现且易商品化,操作简便和经济实惠,且对样品纯度要求不高,因此它已成为一种应用最为广泛和发展最为成熟的生物检测与分析技术,并在近十几年得到迅速发展.ELISA的基础是抗
6、原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.根据酶反应底物显色的深浅进行定性或定量分析.由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,因而使测定具有极高的灵敏度.1伏马毒素完全抗原的制备1.1载体蛋白的选择伏马毒素B.是一种小分子半抗原,分子量为721,只有反应原性而无免疫原性,需要与载体蛋白偶联后才能使动物产生免疫应答.免疫学中常用的载体蛋白有牛血清白蛋白(bovine8eFumalbumin,BSA),卵白蛋白(ovalbumin,OA),牛丙种球蛋白(bovine—globulin,BGG),钥孔嘁血蓝蛋白(keyholel
7、impethemoeyanin,KLH),人血清白蛋白(human8eFumalbumin,HSA)等.BSA和OA由于具有较多的活性联接位点和易溶等特点,在半抗原偶联中应用国外医学卫生学分册2006年第33卷第3期?183?较多.KLH是一种大分子蛋白,分子量为4.5×105～1.3×1,它有几个可利用的赖氨酸残基,具有较高的免疫原性,是近年来人们尝试较多的一种载体蛋白,但由于其分子量较大,因此水溶性较差.在ELISA法检测伏马毒素B.的早期研究中,霍乱毒素(choleratoxin,CT)曾作为载体蛋白使用.1992年Azc
8、ona.Olivera等¨同时以霍乱毒素作为半抗原FB.的载体蛋白和佐剂,建立了应用单克隆抗体和多克隆抗体的ELISA方法检测食品中的伏马毒素B.,其检测限分别达到50ng/ml和100ng/ml.Yeung等"分别以霍乱毒素和人血清白蛋白为载体蛋白,也制备出了
