微生物发酵生产十二碳二元酸的研究

《微生物发酵生产十二碳二元酸的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号：TQ920．6文献标识码：ADOI：103772~．issn．1673—6516．2010．10．012微生物发酵生产十二碳二元酸的研究葛明华，曹务波，王志洲／山东瀚霖生物技术有限公司，山东莱阳265200摘要：热带假丝酵母(Candidattopica1iS)是长碳链二元酸发酵生产中的常用菌种，而热带假丝酵母突变株HP一2—48是一株高产DC12的优良生产菌株。本文对十二碳二元酸的发酵进行了研究，考察了青霉素钠盐、尿素、丙烯酸、pH值对菌体生长、产酸的影响并对其作用机制进行了讨论，并据此建立了长碳链二元酸新的发酵工

2、艺。关键词：十二碳二元酸；热带假丝酵母；发酵长碳链二元酸(Longchaindicarboxyacids)是指碳取3支上述步骤培养好的斜面菌种，分别接入装有经链中含有10个(包括l0个)以上碳原子的脂肪族二羧酸121oC，30min灭菌后的250m1种子培养基的1000ml三角{(简m称CDCn)，包括饱和及不饱和二羧酸，是一类有着重瓶中，于29℃在180r／min旋转摇床上培养24小时，pHn自然，OD6200．5以上，镜检无杂菌，合并后作为摇瓶种要和C广泛工业用途的精细化工产品，是化学工业中合成高级香料、高性能工程塑料、高温

3、电介质、高档热熔胶、耐子液。菌体形态：大部分呈椭球状、部分杆状、部分出芽。寒、增塑剂、高级润滑油、高级油漆和涂料等重要原料。发C．0酵法eh生产长碳链二元酸是70年代兴起的微生物发酵技术摇瓶种培养基：蔗糖：1．5％，KHPO：1．5％，玉米浆：C0．25％，酵母膏：0．35％，尿素：0．55％，重蜡：2％(v／v)。在石油化工领域的应用，具有原料来源广、反应专一性强—¨V．(四)一级种子培养和反应条件温和、产品纯度高，成本低等优点，受到普遍J培养基(质量百分比)：玉米浆：0．35％、酵母膏：重视。其中，十二碳二元酸的市场需求量最

4、大，主要用于合成高技档工程尼龙、高级润滑油、高级油漆和高级粉末涂0．55％、尿素：0．55％、庶糖：3．0％、KH2PO4：1．2％、蔓1重蜡：5．0％。料肼等，是国内目前研究的重点。热带假丝酵母(Candida控制条件：接种量：700ml，罐温：30℃，通风比：l：tropicalis)突变株HP一2—48是一株高产DC12的优良生0．5vvm，罐压：0．10Mpa，pH自然，培养时间：24～28产菌株，已应用于工业发酵生产，现阐述该菌株在工业上小时，OD620≥0．50，镜检无杂菌。的生产结果。(五)二级种子培养一培养基(质

5、量百分比)：玉米浆：0．5％、酵母膏：0．35％、、材料和方法尿素：0．35％、庶糖：3％、KH，PO：1．0％、消泡剂：0．02(一)菌种(v／v)、烷烃：1．0％(v／v)。热带假丝酵母(Candidatropicalis)突变株HP一2—48。控制条件：接种量：6～10％，罐温：30~C，通风比：1：(-)原料0．6vvm，罐压：10Mpa，pH自然，培养时间：10～15小时，正十二烷烃(Ncl2)，含量≥99．0％。OD620≥0．50，镜检无杂菌。(三)摇瓶种子液制备(六)发酵培养取一满接种环热带假丝酵母，涂布在无菌的

6、麦芽汁固1．发酵罐培养基的配方体斜面培养基上(20*200mm试管)，于28～33℃培玉米浆：0．15％、NaC1：0．03％、酵母膏：0．3％、养35～50小时。尿素：0．1～0．3％、葡萄糖：6吨(底料3吨，流加3吨)、固体斜面培养基：8～l1Be麦芽加2％琼脂制成的固KH，PO：1．2％、销酸钾：1．0％、青霉素Na+：0．01％、体斜面。丙烯酸：0～0．2％(v／v)、消泡剂：0．01％(v／v)。2010年第10期65斗枝_i戎果．Managcmcl1IⅢ1dRcsea)-chL111i管理与研究Ncicntitic&

7、iec1mologicalAchievements2．发酵控制条件三、结果和讨论接种量：1O～20％，罐温：28～34℃，通风比：1：(一)青霉素钠盐对产酸的影响0．2～0．5vvm，罐压：0．10Mpa，加烷烃前pH3．0～6．5，从微生物发酵产物生成动力学分析，产物的生成速度加烷烃后pH7．0～9．0，20～48小时，pH7．0～7．4，与细胞向外分泌二元酸的速度成正比。通过对比添加青霉48～72／J、时，pH7．4～7．6，72，J、时后，pH7．6～8．2，素钠盐和不添加青霉素钠盐各三批发现，发酵145小时，控制pH每隔

8、6小时上调pH0．2，培养时间：120～180d~时。培养基中添加青霉素钠盐的发酵平均产酸150．7g／1，而3．补料控制参数培养基中未添加青霉素钠盐发酵平均产酸只有130．5g／葡萄椿配制成20％的葡萄糖液培养基，于121℃，0．10l，产酸水平前者较后者增加