培养实验中条件培养基相关问题探讨

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1、万方数据生亟匡缱金跹痘盘壹2Q!Q生箜呈Q鲞筮!魍doi：10．3969／j．issn．1005-0264．2010．01．008细胞培养实验中条件培养基相关问题探讨’赵志敏叶永安△王硕仁朱陵群高永红孙逸坤北京中医药大学东直门医院(北京，100700)摘要目的：通过LX-2人肝星状细胞条件培养基(CM)对HepG2人肝癌细胞增殖活性的影响，探讨CM各影响因素在离体实验中的作用。方法：收集LX-2细胞第24小时、48小时、72小时条件培养基，设100％、50％、25％共3个浓度，并设l％DMEM组为对照，培养24小时、48小时、72小时；并将收集的第24小时条件培养基分装分别保存

2、至4℃1周、一20℃l周、一80℃3个月、一20℃3个月，采用MTT法检测各组条件培养基对HepG2细胞增殖活性的影响。结果：①收集时间：第24小时、第48小时LX-2CM具有明显的促增殖作用(P<0．01)；培养24小时后，各收集时间点的LX-2CM的促增殖作用为：第24小时>第48小时>第72小时(P第72小时(P<0．01)。②添加浓度：培养24小时后，第24小时CM100％浓度、第24小时CM50％浓度、第24小时CM25％浓度、第48小时CM100％浓度均有明显的促增殖作用(P<0．01)；第24小时CM各浓度比较，100％优

3、于50％(P<0．05)；第48小时CM各浓度，100％优于50％(P<0．05)、25％(P<0．01)。③多元线性回归分析，条件培养基收集时间与HepG2细胞增殖呈负相关，浓度与其呈正相关。④保存条件：一20℃l周CM优于一80℃3个月CM、一20℃3个月CM(P<0．01)；一80℃3个月CM优于一20℃3个月CM(P<0．01)。结论：LX．2CM对HepG2细胞具有明显的促进增殖活性作用，其作用随着收集时间点延长、浓度减小，增殖效果逐渐降低；CM的保存条件对其作用效果有影响。关键词条件培养基；收集时间点；浓度；细胞增殖Studyontheconditionedmedi

4、uminvitroexperimentsZHAOZHI-MIN，YEYONG-AN，WANGSHUO—REN，eta1．DongzhimenHospital，&咖_lgUniversityofChineseMedicine(eel-扣ng100700、ChinaAbstractObjective：Toobservetheeffectofconditionedmedium(CM)ofLX-2human-derivedhepaticstellatecellOilpmlif-erationinHepG2cells．toexploretherolesofconditionedmediu

5、mwithdifferentfactorsinvitroexperiment．Methods：Thecon—ditionedmediumofLX-2wereeoUectedafter24，48and72hs，anddividedintothreegroupsinthreeconcentrationlevels，whichwe陀100％，50％，25％，I％DMEMasthecontrolgroup．TheconditionedmediumofLX-2c0Uectedafter24hsweredi．videdinto4groupsaccordingtopreservationco

6、nditions，whichwere4。Coneweek，一20℃oneweek，一800Cthreemonths，一20℃threemonths．andtheinfluenceofthepreservationconditionsOHtheconditionedmediumwe他observed．MTreolorimet-ricassaywasusedtoobservetheinfluenceonproliferationofHepG2cellsafterincubatewithdifferentCM．Results：①CMcol—leetingtimepoints：cont

7、rastwithl％DMEMgroup．thegroupsofCMCOllatedon24hand48hhadsignificantlyproliferationonHepG2cells，andthedifferenceswerestatisticalsignificance(P<0．01)．’11ledifferencesamongthegroupsofCMcollatedon24h，48hand72hafterincubatedfor24hwerestatisticalsignifica