实验常用培养基

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1、附录2实验常用培养基及制备1.马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）（1）成分：马铃薯（去皮切块）300g琼脂20.0g葡萄糖（或蔗糖）20.0g蒸馏水1000ml（2）制法：将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10～20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20min。2.牛肉膏蛋白胨培养基（1）成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g蒸馏水1000mlPH7.2（2）制法：121℃灭菌20min。如配制固体培养基，需加琼脂15~20g；如配制半固体培养基，则加琼脂4~

2、6g。3.察氏琼脂养基（1）成分：硝酸钠3g磷酸氢二钾1g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g氯化钠0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂20g蒸馏水1000ml（1）制法：加热溶解，分装后121℃高压灭菌20min。4.高氏1号培养基（1）成分：可溶性淀粉20g硝酸钾1g硫酸镁0.5g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂15~20g蒸馏水1000mlPH7.2~7.4（2）制法：将上述成分混合，于0.10MPa灭菌20min，备用。5.马丁氏琼脂培养基（分离真菌用）（1）成分：葡萄糖10g0.1%孟

3、加拉红溶液3.3ml蛋白胨5g琼脂15~20g磷酸二氢钾1g蒸馏水8000mlMgSO4·7H2O0.5g（1）制法：112℃灭菌30min.。在分别加入2%去氧胆酸钠溶液20ml（分别灭菌，使用前加入），链霉素溶液（10000U/ml）3.3ml（用无菌水配制，临用前加入）。6.糖发酵培养基（1）成分：牛肉膏5gPH7.4蛋白胨10g磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）2g氯化钠3g0.2%滇麝香草酚蓝溶液12ml蒸馏水1000ml（2）制法：①葡萄糖发酵罐按上述成分分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小

4、管的小试管内，121℃高压灭菌15min。②其他各种糖发酵管科按上述成分配好后，分装每瓶100ml，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5ml糖溶液加入于100ml培养基内，怡无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14～30d。7.缓冲葡萄糖蛋白胨水液体培养基（MR和V-P试验用）（1）成分：磷酸氢二钾5g葡萄糖5g多胨7g蒸馏水1000mlPH7.0（2）

5、制法：溶化后校正PH，分装试管，每管1ml，121℃高压灭菌15min.（1）甲基红（MR）试验：自琼脂培养物接种本培养基，于36℃±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30ml95%乙醇中，然后加入20ml蒸馏水。（1）（4）V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于36℃±1℃培养2～4d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%ɑ-萘酚-乙醇溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml，充分振摇试管，观察结

6、果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36℃±1℃下培养4h再进行观察。8.蛋白胨水、靛基质试剂（1）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）20g蒸馏水1000ml氯化钠5gpH7.4（2）制法：按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。（3）靛基质试剂：①柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25ml。②欧-波试剂：将1个对二甲氨基苯甲醛溶解于95ml95%乙醇中，然后缓慢加入浓盐酸20ml。试验方法：挑取小量培养物接种，在36℃±1℃培养1～2d，必要时可培养4～5

7、d。加入柯凡克试剂约0.5ml，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5ml，沿着壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触呈玫瑰红色。注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。9.西蒙氏柠檬酸盐培养基（1）成分：氯化钠5g柠檬酸钠5g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g琼脂20g磷酸二氢铵1g蒸馏水1000ml磷酸氢二钾1g0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mlpH6.8（2）制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热容溶解。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，

8、121℃高压灭菌15min。放成斜面。10.苯丙氨酸培养基（1）成分：酵母浸膏3g氯化钠5gDL-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g）2g琼脂12g磷酸氢二钠1g蒸馏水1000ml（2）制法：加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。11.硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）（1）成分：牛肉膏3g硫代