动物细胞的培养条件和培养基

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1、第四节动物细胞的培养条件和培养基细胞体外培养基本条件:①无菌②营养充足,防止有害物质③氧气④随时清除代谢有害物质⑤良好的生存外环境⑥及时分种一、动物细胞的培养条件⒈器材的清洗和消毒⑴器材的清洗浸泡、刷洗、泡酸、冲洗⑵器材的消毒灭菌物理消毒化学消毒⒉水质:电阻值大于18MΩ,去热原。⒊pH:7.2～7.4⒋渗透压:290～300mOsm/kg⒌温度:37±0.5C⒍空气:氧的饱和质60%,氧分压4～0.7kPa二、动物细胞的培养基的种类和组成分3类:⒈天然培养基⒉合成培养基⒊无血清培养基⒈天然培养基

2、血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定⒉合成培养基DME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640⑴氨基酸⑵维生素⑶糖类⑷无机盐⑸其它成分添加小牛血清：添加小牛血清的作用⑴提供生长因子和激素⑵提供贴附因子和伸展因子⑶提供结合蛋白⑷提供必需脂肪酸和微量元素⒊无血清培养基①提高重复性②减少微生物污染③供应充足稳定④产品易纯化⑤避免血清因素对细胞的毒性⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰无血清培养基加入添加剂⑴生长因子和激素⑵结合蛋白⑶贴附因子和伸展因子⑷有利细胞生长的因子和元素第五节动物细胞培养方

3、法和操作方式一、动物细胞大规模培养的方法依细胞种类:原代培养、传代培养依培养基:液体培养、固体培养依培养器和方式:静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载体培养、中空纤维培养、固定床或流化床培养从生产实际分为:悬浮培养贴壁培养贴壁-悬浮培养⒈悬浮培养让细胞自由的悬浮于培养基内生长繁殖。⒉贴壁培养让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。⒊贴壁-悬浮培养⒊贴壁-悬浮培养⑴微载体培养⑵包埋和微囊培养⑶结团培养二、动物细胞培养的操作方式⒈分批式操作⒉半连续式操作⒊灌流式操作第六节动物细胞生物反应器及其检测控制

4、系统一、动物细胞生物反应器的类型及其基本结构⒈搅拌式生物反应器⒉气升式生物反应器⒊中空纤维式生物反应器⒋透析袋或膜式生物反应器⒌固定床或流化床式生物反应器⒈搅拌式生物反应器⒉气升式生物反应器⒊中空纤维式生物反应器平床式中空纤维式生物反应器⒋透析袋或膜式生物反应器⒌固定床或流化床式生物反应器CellGenplus生物反应器二、动物细胞生物反应器的检测控制系统⒈培养过程需检测的物化参数直接在线检出取样离线检测检测后计算⒉主要参数的检测和控制方法⒉主要参数的检测和控制方法⑴温度⑵pH①在培养初期，控制进氧

5、量②当细胞密度提高后控制NaHCO3的量⑶溶氧⑷搅拌⑸进出液流量⑹其它第七节动物细胞制药的前景与展望一、提高产量降低成本和改进质量方面的研究二、转基因动物的研究三、组织工程的研究一、提高产量、降低成本和改进质量方面的研究为了提高产量,要提高细胞表达水平。为降低成本，须改进培养基配方。为改进产品质量，关键是糖基化质量。改进工艺，生产设备等二、转基因动物的研究自1982年Palimiter提出用转基因动物来生产药用蛋白以来，发展迅速。优点：产量高成本低质量与天然一样。现还有不成熟之处。对动物和人的健康

6、的影响。三、组织工程的研究组织工程：通过对大量细胞的培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于临床，或用培养的细胞进一步加工构成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管、人造骨等并用于临床治疗。