细胞培养实验中条件培养基相关问题探讨

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1、中西医结合肝病杂志2010年第20卷第1期·23·doi：10．3969／j．issn．1005-0264．2010．O1．008细胞培养实验中条件培养基相关问题探讨赵志敏叶永安王硕仁朱陵群高永红孙逸坤北京中医药大学东直门医院(北京，100700)摘要目的：通过LX一2人肝星状细胞条件培养基(CM)对HepG2人肝癌细胞增殖活性的影响，探讨CM各影响因素在离体实验中的作用。方法：收集LX一2细胞第24小时、48小时、72小时条件培养基，设100％、50％、25％共3个浓度，并设1％DMEM组为对照，培养24小时、48小时、72小时；并将

2、收集的第24小时条件培养基分装分别保存至4oC1周、一20℃1周、一80℃3个月、一20℃3个月，采用MTT法检测各组条件培养基对HepG2细胞增殖活性的影响。结果：①收集时间：第24小时、第48小时LX一2CM具有明显的促增殖作用(P<0．01)；培养24小时后，各收集时间点的LX-2CM的促增殖作用为：第24小时>第48小时>第72小时(P<0．01)；培养48小时后，第48小时>第72小时(P<0．01)。②添加浓度：培养24小时后，第24小时CM100％浓度、第24小时CM50％浓度、第24小时CM25％浓度、第48小时CM10

3、0％浓度均有明显的促增殖作用(P<0．O1)；第24小时CM各浓度比较，100％优于50％(P<0．05)；第48小时CM各浓度，100％优于50％(P<0．05)、25％(P<0．01)。③多元线性回归分析，条件培养基收集时间与HepG2细胞增殖呈负相关，浓度与其呈正相关。④保存条件：一20~C1周CM优于一803个月CM、一2O℃3个月CM(P<0．O1)；一80℃3个月CM优于一20℃3个月CM(P<0．O1)。结论：LX一2CM对HepG2细胞具有明显的促进增殖活性作用，其作用随着收集时间点延长、浓度减小，增殖效果逐渐降低；CM

4、的保存条件对其作用效果有影响。关键词条件培养基；收集时间点；浓度；细胞增殖StudyontheconditionedmediaminvitroexperimentsZHAOZHI-MIN，YEYONG-AN，WANGSHUO—REN，eta1．DongzhimenHospital，BeringUnivers~ofChineseMedwine(Bei一曲g100700)ChinaAbstract0bjective：Toobservetheefectofconditionedmedium(CM)ofLX-2human·derivedhepa

5、ticstelatecellonpmlif-erationinHepG2cells，toexploretherolesofconditionedmediumwithdifferent~etominvitroexperiment．Methods：Thecon—ditionedmediumofLX-2werecollectedafter24，48and72hs，anddividedintothreegroupsinthreeconcentrationlevels，whichwere100％，50％，25％，1％DMEMasthecontro

6、lgroup．TheconditionedmediumofLX-2colectedafter24hsweredi—videdinto4groupsaccordingtopreservationconditions，whichwere4~Coneweek，一20~Coneweek，一80％threemonths，一20℃threemonths．andtheinfluenceofthepreservationconditionsontheconditionedmediumwereobserve&MqTcolorimet—ricassaywa

7、susedtoobservetheinflueneeonproliferationofHepG2cellsafterincubatewithdiferentCM．Results：①CMcol—lectingtimepoints：contrastwithl％DMEMgroup，thegroupsofCMcollectedon24hand48hhadsignificantlyproliferationonHepG2cells，andthedifferenceswerestatisticalsignificance(P<0．01)．Thedi

8、ferencesamongthegroupsofCMcollectedon24h，48hand72hafterincubatedfor24hwerestatisticalsignificance(P<0．0