＂双固一通＂电针治疗对老年阳虚模型大鼠肝脏组织p16、p21蛋白表达的影响

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1、湖北中医杂志2014年01月第36卷第O1期HubeiJournalofTCMJAiV．2014．Vot．36No．01“双固一通’’电针治疗对老年阳虚模型大鼠肝脏组织P16、P21蛋白表达的影响EfectsofShuangguyitongElectroacupunctureonExpressionofLiverTissueP21、P16ProteininAgingRatswithYang-deficiency刘建民，刘静，王华，吕景芳，陈明扬，王静芝(湖北中医药大学针灸骨伤学院湖北武汉4300

2、61)$通讯作者：刘静(1988一)，女，201l级硕士研究生，E—mail：angel_lj2006@163．com。基金项目：湖北省自然科学基金重点项目，课题编号2008CDA051。摘要：目的探讨“双固一通”配穴电针对老年阳虚模型大鼠肝组织P16、P21蛋白表达的影响。方法选用5月龄清洁级sD雄性大鼠48只，随机分为正常组、模型组、“双固一通”电针组、电针对照组，除正常组外，其余3组大鼠每日皮下注射D一半乳糖40d后再肌肉注射氢化可的松7d，制作老年阳虚模型。“双固一通”电针组取“关元”、

3、“后三里”、“百会”穴，电针对照组取“中极”、“阴陵泉”、“印堂”穴，均每周治疗6次；其余两组同时行抓取固定，不治疗，共4周。治疗结束后采用透射电镜观察肝组织超微结构变化；免疫组化法检测肝脏组织P16、P21蛋白的表达。结果模型组大鼠肝细胞呈现凋亡状态，肝组织P16、P21蛋白阳性细胞积分比明显升高；电针治疗后，大鼠肝脏组织超微结构得到改善，PI6、P21蛋白表达均下调，且“双固一通”电针组效果优于电针对照组。结论“双固一通”电针法与常规针刺法均能有效下调肝脏组织中P16、P21蛋白的表达，但在

4、P16蛋白表达的调节中，“双固一通”电针法优于常规针刺法。关键词：阳虚证；“双固一通”电针法；肝脏P16、P21蛋白；实验研究中图分类号：R245文献标识码：A文章编号：1000—0704(2014)01—0001—03阳虚证是中医临床常见的证候之一，是机体组织器官功能分析纯。减退、机体反应性降低、代谢活动减弱、热量不足的病理状态L】。1．2实验动物与分组老年阳虚证的一个重要特征是机体代谢活动减弱，而肝脏是物实验动物为5月龄SpragueDawley健康雄性大鼠48只，清质代谢的重要器官。因此本

5、实验以D一半乳糖和氢化可的松致洁级，体重(180±20)g，由武汉大学动物实验中心提供，动物许老年阳虚模型大鼠为研究对象，通过观察“双固一通”配穴电针可证号：SCXK(鄂)2008—0004。所有动物饲养于温度(18—对老年阳虚模型大鼠肝脏组织超微结构的改变及对P16、P21蛋25℃)和湿度(45％一55％)较为恒定的动物饲养室，动物可以自白表达情况的影响，来探讨“双固一通”电针治疗对老年阳虚模由摄食和饮水。大鼠适应性喂养3天后，根据简单随机排序法分型大鼠肝脏的保护作用。为正常对照组(Norma

6、lcontrolgroup，简写为NC)、老年阳虚模型1材料与方法组(Modelgroup，简写为Mode1)、“双固一通”电针组(Electroacu1．1主要仪器与试剂puncturetreatmentgroup，简写为EA)、电针对照组(Electroacu．LKB—V型超薄切片机(瑞典BROMMA公司)；口立H一600puncturecontrolgroup，简写为EAc)。每组各12只。型透射电镜(日本日立公司)；光学显微镜(日本OLYMPUS公1．3造模方法[]司)；ZDP—A205

7、0A电热培养箱(上海智城分析仪器制造有限公大鼠适应性喂养1周后，开始造模，除正常组外，其余三组按司)；25％戊二醛(上海国药集团化学试剂有限公司)；丙酮(上海每鼠、每日125mg／kg给予D一半乳糖颈背部皮下注射，连续40d生工公司)；环氧树脂(Epon812Serva)：(GeinbiochemicaHeide1．之后再行后腿肌肉注射氢化可的松1．5m100g，连续7d；正常组berg)；SV0002一兔IgG试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；每日皮下注射等量0．9％生理盐水1次，连续47

8、d。造模成功后D一半乳糖(sigma公司)；P16、P21抗体(北京博奥森生物技术有的大鼠出现拱背蜷曲、肢尾冷、挤卧一起，被毛蓬松稀疏无光泽、限公司)；DAB显色试剂盒(北京中杉金桥)，其余试剂均为国产足趾浮肿，反应迟钝、活动减少，少食、小便多等虚损状。根据中一2一湖北中医杂志2014年01月第36卷第o1期医阳虚证辨证参考标准J，类似“阳虚”状态。色，3分为棕褐色(染色深浅需与背景着色相对比)；阳性细胞所1．4各组处理方法占百分比打分：0分为阴性，1分为阳性细胞数≤10％，2分为参照华兴邦等制