"双固一通"电针治疗对老年阳虚模型大鼠肝脏组织p16、p21蛋白表达的影响

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1、湖北中医杂志2014年01月第36卷第O1期HubeiJournalofTCMJAiV.2014.Vot.36No.01“双固一通’’电针治疗对老年阳虚模型大鼠肝脏组织P16、P21蛋白表达的影响EfectsofShuangguyitongElectroacupunctureonExpressionofLiverTissueP21、P16ProteininAgingRatswithYang-deficiency刘建民,刘静,王华,吕景芳,陈明扬,王静芝(湖北中医药大学针灸骨伤学院湖北武汉4300

2、61)$通讯作者:刘静(1988一),女,201l级硕士研究生,E—mail:angel_lj2006@163.com。基金项目:湖北省自然科学基金重点项目,课题编号2008CDA051。摘要:目的探讨“双固一通”配穴电针对老年阳虚模型大鼠肝组织P16、P21蛋白表达的影响。方法选用5月龄清洁级sD雄性大鼠48只,随机分为正常组、模型组、“双固一通”电针组、电针对照组,除正常组外,其余3组大鼠每日皮下注射D一半乳糖40d后再肌肉注射氢化可的松7d,制作老年阳虚模型。“双固一通”电针组取“关元”、

3、“后三里”、“百会”穴,电针对照组取“中极”、“阴陵泉”、“印堂”穴,均每周治疗6次;其余两组同时行抓取固定,不治疗,共4周。治疗结束后采用透射电镜观察肝组织超微结构变化;免疫组化法检测肝脏组织P16、P21蛋白的表达。结果模型组大鼠肝细胞呈现凋亡状态,肝组织P16、P21蛋白阳性细胞积分比明显升高;电针治疗后,大鼠肝脏组织超微结构得到改善,PI6、P21蛋白表达均下调,且“双固一通”电针组效果优于电针对照组。结论“双固一通”电针法与常规针刺法均能有效下调肝脏组织中P16、P21蛋白的表达,但在

4、P16蛋白表达的调节中,“双固一通”电针法优于常规针刺法。关键词:阳虚证;“双固一通”电针法;肝脏P16、P21蛋白;实验研究中图分类号:R245文献标识码:A文章编号:1000—0704(2014)01—0001—03阳虚证是中医临床常见的证候之一,是机体组织器官功能分析纯。减退、机体反应性降低、代谢活动减弱、热量不足的病理状态L】。1.2实验动物与分组老年阳虚证的一个重要特征是机体代谢活动减弱,而肝脏是物实验动物为5月龄SpragueDawley健康雄性大鼠48只,清质代谢的重要器官。因此本

5、实验以D一半乳糖和氢化可的松致洁级,体重(180±20)g,由武汉大学动物实验中心提供,动物许老年阳虚模型大鼠为研究对象,通过观察“双固一通”配穴电针可证号:SCXK(鄂)2008—0004。所有动物饲养于温度(18—对老年阳虚模型大鼠肝脏组织超微结构的改变及对P16、P21蛋25℃)和湿度(45%一55%)较为恒定的动物饲养室,动物可以自白表达情况的影响,来探讨“双固一通”电针治疗对老年阳虚模由摄食和饮水。大鼠适应性喂养3天后,根据简单随机排序法分型大鼠肝脏的保护作用。为正常对照组(Norma

6、lcontrolgroup,简写为NC)、老年阳虚模型1材料与方法组(Modelgroup,简写为Mode1)、“双固一通”电针组(Electroacu1.1主要仪器与试剂puncturetreatmentgroup,简写为EA)、电针对照组(Electroacu.LKB—V型超薄切片机(瑞典BROMMA公司);口立H一600puncturecontrolgroup,简写为EAc)。每组各12只。型透射电镜(日本日立公司);光学显微镜(日本OLYMPUS公1.3造模方法[]司);ZDP—A205

7、0A电热培养箱(上海智城分析仪器制造有限公大鼠适应性喂养1周后,开始造模,除正常组外,其余三组按司);25%戊二醛(上海国药集团化学试剂有限公司);丙酮(上海每鼠、每日125mg/kg给予D一半乳糖颈背部皮下注射,连续40d生工公司);环氧树脂(Epon812Serva):(GeinbiochemicaHeide1.之后再行后腿肌肉注射氢化可的松1.5m100g,连续7d;正常组berg);SV0002一兔IgG试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);每日皮下注射等量0.9%生理盐水1次,连续47

8、d。造模成功后D一半乳糖(sigma公司);P16、P21抗体(北京博奥森生物技术有的大鼠出现拱背蜷曲、肢尾冷、挤卧一起,被毛蓬松稀疏无光泽、限公司);DAB显色试剂盒(北京中杉金桥),其余试剂均为国产足趾浮肿,反应迟钝、活动减少,少食、小便多等虚损状。根据中一2一湖北中医杂志2014年01月第36卷第o1期医阳虚证辨证参考标准J,类似“阳虚”状态。色,3分为棕褐色(染色深浅需与背景着色相对比);阳性细胞所1.4各组处理方法占百分比打分:0分为阴性,1分为阳性细胞数≤10%,2分为参照华兴邦等制

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