鼻咽癌相关新基因npcedrg突变型重组表达载体的构建及生物信息学分析

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1、壹堂杂志2013年11月第41卷第6期551文章编号：2095—1116(2013)06—0551—04·基础医学-鼻咽癌相关新基因NPCEDRG突变型重组表达载体的构建及生物信息学分析阳帅，胡华，赵强，龚邵新，贺荣芳，张小丽，贺修胜(1．南华大学附属第一医院病理科，湖南衡阳421001；2．南华大学附属第二医院病理科；3．南华大学肿瘤研究所)摘要：目的构建带His标签的突变型及野生型pcDNAT3．1／myc—HisB／NPCEDRG重组表达载体。方法以pcDNA3．1·NPCEDRG重组质粒为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增NPCEDRG基

2、因编码区，利用PCR过程中的碱基错配，随机突变产生NPCEDRG的突变体，分别将野生型及突变型NPCEDRG基因编码区cDNA插入pcDNATM3．1／myc—HisB真核表达载体，双酶切鉴定，测序验证，生物信息学方法进行蛋白质结构预测。结果双酶切突变型及野生型pcDNA3．1／myc．HisB／NPCEDRG重组表达载体，均产生519bp长度的目的片断。测序结果证实，突变型NPCEDRG基因有两个点发生了突变，分别是T2．c∞和T287-C盯，但没有移码突变，在线生物信息学分析结果示其相应氨基酸序列改变为v”一A和M跎一T；野生型NPCEDRG基因序列

3、与Genebank已知序列一致。两个重组载体插入片段大小均为513bp，插入方向及位置正确，能表达预期所要的融合蛋白。结论成功构建了带His标签的突变型及野生型pcDNA3．1／myc—HisB／NPCEDRG重组表达载体，为深入研究NPCEDRG基因功能和揭示鼻咽癌发病分子机制提供实验手段。关键词：NPCEDRG；聚合酶链式反应；随机突变中图分类号：R739．6文献标识码：AConstructionofEukaryoticExpressionRecombinantofMutationalNPCEDRGandItsBioinformaticsAnalys

4、isYANGShuai，HUHua，ZHAOQiang，etal(DepartmentofPathology，theFirstAffiliatedHospital，Unive~ityofSouthChina，Hengyang，Hunan421001，China)Abstract：0bjectiveToconstructtwoeukaryoticexpressionvectorsofmutationalandwildNPCEDRGbyRandomMutation．MethodsTheORFofNPCEDRGgenewasamplifiedfromthere

5、combinantplasmidofpcDNA3．1一NPCEDRGbypolymerasechainreaction(PCR)．andmutationalNPCEDRGwasprocuredbyRandomMutation．TheORFs，cDNAsofthewildNPCEDRGgeneanditsmutantwererecombinedrespectivelyintothepcDNA3．1／myc—HisBvectorwithtwotagsofmycand6×Hisfollowingthetargetgenes．Thentheproductswer

6、etransferredintoE．coliDH5ct，andthepositivecloneswerescreenedafterbeingidentifiedwithrestrictiveenzymesandsequenceanalysis．ResultsThe519bptargetsegmentsofmutationalandwildNPCEDRGwereobtainedsuccessfullyindigestionproducts．TheDNAsequenceofwildNPCEDRGwasc0nsistentwiththecDNAsequence

7、ofNPCEDRGfromGeneBank．AndthesequenceofthemutationalNPCEDRGre-vealedtwoalteredcodons．r260C2加andr287-C87．whichresuhedinaminoacidexchangesV73-A’andM82_T82．Conclu．sionTworecombinantexpressionvectorsofmutatioualorwildNPCEDRGgenewereconstructedsuccessfully．Keywords：NPCEDRG；polymerasech

8、ainreaction(PCR)；randommutation收稿日期：2013