临床医学毕业论文高脂饮食大鼠脂肪组织甘油三酯脂酶的表达及罗格列酮的干预.doc

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1、XX大学毕业论文高脂饮食大鼠脂肪组织甘油三酯脂酶的表达及罗格列酮的壬预姓名：2014年6月25日高脂饮食大鼠脂肪组织甘油三酯脂酶的表达及罗格列酮的干预作者：唐勇宋光耀杨秀红张明明张莆郝欣欣【摘要】H的观察高脂饮食胰岛素抵抗人鼠脂肪组织屮脂肪甘油三酯脂酶的表达及罗格列酮的干预效果。方法5月龄雄性Wistar大鼠共40只随机分为正常对照组、高脂对照组和高脂+罗格列酮组，在清醒状态下行高朕岛索正葡萄糖钳夹实验评价胰岛素敏感性，RTPCR法和Western蛋白印迹技术检测脂肪组织屮脂肪甘油三酯脂酶mRNA及蛋口表达。结果（1）喂养4周末，高脂对照组的葡萄糖输注率低于正常对照组；8周末，

2、高脂对照组甘油三酯、胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛索、游离脂肪酸及内脏脂肪相对含量均明显升高，葡萄糖输注率降低；（2）罗格列酮干预后甘油三酯、胆•固醇、血糖、唳岛素、游离脂肪酸和内脏脂肪和对含量降低，葡萄糖输注率升高；（3）与正常对照组相比，高脂对照组大鼠脂肪组织脂肪甘油三酯脂酶mRNA和蛋白的表达均减低，罗格列酮干预没有改变其表达；（4）ATGL蛋白的表达与朕岛素、游离脂肪酸负相关，与葡萄糖输注率呈正相关。结论高脂喂养可引起胰岛索抵抗和脂肪组织脂肪甘油三酯脂酶的表达减低，这种变化在胰岛索抵抗早期可减少游离脂肪酸的释放。【关键词】高脂饮食；脂肪甘油三酯脂酶；胰岛素抵抗；罗格列酮研究

3、证实，游离脂肪酸（freefattyacids,FFA）的升高在肥胖及胰岛素抵抗的发生屮发挥重要作用（1〕。循环屮的FFA主要来源与脂肪组织屮甘油三酯的分解，所以推测脂肪分解的杲常可能参与了胰岛素抵抗的发生发展。脂肪甘油三酯脂酶（Adiposetriglyceridelipase,ATGL）是Zimmerman等于2004年发现的脂肪酶（2）,主要将甘油三酣水解为甘油二酣，与激素敏感性脂肪酶—•起占脂肪组织甘油三酯水解活性的95%〔3〕。罗格列酮作为过氧化物酶增殖体激活受体丫（PPARy）的激动剂，可以改善朕岛索抵抗，并对多种脂肪代谢相关酶如激索敏感性脂肪酶、脂蛋口脂肪酶等的表

4、达有影响（4〕。本实验通过高脂饮食建立胰岛素抵抗大鼠模型，观察脂肪组织＞1*ATGL的表达及罗格列酮的干预作用，探讨脂肪分解界常在胰岛素抵抗屮的作用及罗格列酮对于脂肪分解过程屮关键酶的影响。1资料与方法1」实验动物及模型建立5月龄健康雄性Wistar大鼠40只适应性喂养1w,随机分为正常对照组14只，高脂饮食组26只。正常对照组给予基础饲料（热量纽成：碳水化合物占65.5%,脂肪占10.3%,蛋白质占24.2%）,总热量为348kcal/100g；高脂饮食组喂以高脂饲料（热量组成为脂肪59.8%,碳水化合物20.1%,蛋白质20.1%）,总热量为501kcal/100go喂养4

5、w后每组取6只行高肺岛索正葡萄糖钳夹实验证实高脂饮食组胰岛索抵抗状态形成。高脂组剩余20只大鼠随机分为高脂对照组和高脂+罗格列酮组，每组10只。1.2药物干预高脂+罗格列酮组给予马来酸罗格列酮（RSG,葛兰素史克公司提供,药物批号05060018）蒸锚水混悬液3mg-kg-1-d-l灌胃，正常对照组和高脂对照组给予等量生理盐水灌胃，每dl次，共4w。1.3取材疗程结束后禁食10h内眦取血，分离血清待测血脂、胰岛素等指标。并行口服葡萄糖耐量试验及干预后高胰岛素正葡萄糖钳夹实验，了解各组人鼠对葡萄糖负荷的耐受情况及葡萄糖输注率（glucoseinfusionrate,G1R）的变化

6、。钳夹实验结束后，保留颈静脉和颈动脉插管，结扎固定于颈后皮肤，清醒后单笼饲养，自由进食饮水。3d后，于颈动脉通管放血处死大鼠，测定内脏脂肪组织重量，留取数块肾周脂肪组织0.1%DEPC水冲洗后迅速置于液氮屮，转移至・70°C低温冰箱用于ATGL蛋白和mRNA的测定。1.4高胰岛素正葡萄糖钳夹实验大鼠饲养第4周末和第8周末，从每组随机选取6周大鼠迸•行钳夹实验。3%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,Z后行颈动脉及颈静脉插管，导管经皮下从颈后引出，100U/mL肝素封管，结扎后固定于颈后皮肤。大鼠清醒后单笼饲养，自由采食饮水。待4〜5天后大鼠恢复至插管前水平，是动物在清醒状

7、态、自由活动前提下行高胰岛索正葡萄糖钳夹实验。术屮胰岛索输注率为4葡萄糖浓度为30%,具体实验步骤参见文献（5）。1.5血液生化指标测定血清血糖、甘油三酣和胆固醇采用酶法在BeckmanlX20全自动生化仪上测定；血清游离脂肪酸采用铜显色法测定；血清丿质岛索采用放射免疫法测定。1.6脂肪组织ATGLmRNA测定RNAisoplus（大连宝生物）试剂盒提取脂肪组织的总RNA,以卩actin为内参照，半定量RTPCR法（TakaraRNAPCRkitAMV,大连栄生物）测定ATGLmRNA表达量