全能型酵母双杂交系统和蛋白表达系统

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1、酵母双杂交系统和蛋白表达系统DUALsystems产品——全能型酵母双杂交系统和蛋白表达系统DUALsystemsBioTech公司成立于2000年，是从瑞士苏黎世大学独立出来具有自主产权的生物公司。DUALsystems公司一心致力于蛋白组学领域产品的研发，包括通过酵母系统进行蛋白质间相互作用研究的产品和服务，cDNA文库构建试剂和服务，在酵母中或E.Coli中进行重组蛋白的制备和纯化，以及一系列相关的试剂和抗体。DUALsystems公司作为蛋白组学领域的最主要供应商，已有多年的蛋白组学领域的经验，并不断开阔创新，因此可以提供高

2、质量和独特的产品，也可以提供一流的定制服务。♦蛋白质间相互作用筛选系统-DUALhybrid系统——胞质蛋白、核蛋白的酵母双杂交系统-DUALmembrane系统——膜蛋白的酵母双杂交系统-DUALhunter系统——转录因子、自我激活蛋白、含大量酸性氨基酸蛋白的酵母双杂交系统♦蛋白表达与纯化系统-DUALXPress蛋白表达系统(new)——EColi.系统-KickStart蛋白表达系统——酵母系统♦cDNAlibrary构建系统♦酵母工具♦其他：抗体和试剂DUALhybrid筛选技术是基于最初的酵母双杂交系统，在筛选新的蛋白质

3、间相互作用方面，进行多方面的优化，如速度、特异性和成本。DUALmembrane系统是DUALsystems公司最独特的具有自主专利的产品系列。它摆脱了传统酵母双杂交的最大局限性（即只能检测核蛋白之间的相互作用），成为检测或筛选跨膜蛋白间相互作用强有力的检测技术。它利用分离的泛素系统（split-ubiquitin）直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用，是目前市面上唯一可提供检测膜蛋白间相互作用的新基因系统。DUALXPress技术是在E.coli中表达重组蛋白的革新系统，极高水平，高度可溶性。DualTRAP树脂的非特异性粘合能力

4、非常低，因此此树脂是一步纯化蛋白的最佳选择。EasyClonecDNAlibrary构建试剂盒适用于高度复杂cDNAlibraries简单而快速的构建。1www.dualsystems.comwww.dakewe.netFree:4008197199Tel:010-52086640reagent_bj@dakewe.net酵母双杂交系统和蛋白表达系统PartI:蛋白质间相互作用筛选系统蛋白质－蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特征，例如细胞与细胞、细胞与基质的连接；细胞信号传导；代谢网络；以及转录、翻译调节等。传统的研究蛋白质间

5、相互作用的工具局限于生化的方法，如CO-IP，Biacore，亲合层析，质谱分析等。但是生化的方法采用的是体外实验来研究蛋白质间的相互作用，在研究中往往受到许多外界实验条件、环境和方法的影响。同时，生化方法存在诸多缺点，如耗时，繁琐，低效。而通过酵母系统进行基因水平的检测，是采用体内实验来研究蛋白之间的相互作用，使研究方法发生了革命性的改变，它不受外界影响，方法精确，易于操作。更具特色的是所有操作均是在核酸水平上进行，无需纯化大量的蛋白，并可精确地测定蛋白质之间弱相互作用。目前已知的蛋白质间相互作用有50％是通过酵母双杂交技术发现的

6、。但是传统的酵母双杂交技术只适用于核内蛋白质间的相互作用研究，大大局限了它的使用范围。DUALsystems公司攻克了这些局限，为广大蛋白组学研究者提供了最广范围的酵母检测系统来证明和筛选蛋白质间的相互作用。此系统适用于几乎所有蛋白质间的相互作用检测，包括整合膜蛋白，膜相关蛋白，胞浆蛋白，以及核蛋白。1．DUALhybridtechnology——适用于核内蛋白质间相互作用的研究1.1原理酵母双杂交系统的建立与发展基于真核生物转录调控系统，充分利用了真核转录激活因子的组件式结构。转录激活因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构域，

7、即DNA特异性结合结构域(DNA-bindingdomain,DBD)与转录激活结构域(transcriptionalactivationdomain,AD)。DBD结合靶基因上游的操纵子序列，然后AD聚集RNA聚合酶II复合物，从而启动转录。这两个结构域分开时仍各具有功能，但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstreamactivatingsequence,UAS）的启动子，使下游靶基因得到转录（图A,B）。基于这一特性，Fields等人于1

8、989年设计了一个检测蛋白质间相互作用的系统，即酵母双杂交系统。在传统的酵母双杂交技术中，将两个待测蛋白分别与DBD和AD结构域融合，形成的融合蛋白分别称为“bait”蛋白（即诱饵，或已知蛋白，或X蛋白）和“prey”蛋白（即猎物，或