bvdv-2 e2基因的原核表达及重组蛋白反应原性的研究

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1、第31卷第6期石河子大学学报(自然科学版)Vo1．31No．62013年12月JournalofShiheziUniversity(NaturalScience)Dec．2O13文章编号：10077383(2013)06—0680—04BVDV一2E2基因的原核表达及重组蛋白反应原性的研究刘昱成，孟庆玲。，乔军，王国超，张倩，贺志吴，杨海波，陈创夫(1石河子大学动物遗传改良与疾病控制新疆自治区重点实验室，石河子832003；2中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州730046)摘要：为了对BVDV进行诊断，根据GenBank登录的BVDV-2E2基因序列，

2、设计特异性引物，对BVDV-2新疆分离株SWE2基因进行扩增，克隆入T载体中测序，然后亚克隆人BI21(DE3)表达载体pET-28a中，构建重组表达载体pET-28a-E2，并转化人大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌，SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白相对分子量为32ku；Westernblot分析表明该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应，证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性，为B'vX)V-2诊断试剂研发奠定基础。关键词：BVDV；E2基因；载体构建；原核表达中图分类号：$852．65文献

3、标志码：AProkaryoticExpressionE2geneofBovineViralDiarrheaVirusGenotype2andReacti0n0genicityofRecombinantProteinLIUYucheng，MENGQingling，QIAOJun，WANGGuochao，ZHANGQian，HEZhihao，YANGHaibo，CHENChuangfu(1KeyLaboratoryofAnimalGeneticImprovementandDiseaseControlofXinjiangUygurAutonomousRegion·ShiheziUniver

4、sity，Shihezi832003，China；2KeyLaboratoryofNationalVeterinaryEtiologicalBiology，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，LanzhouVeterinaryResearchInstitute，Lanzhou730046，China)Abstract：AccordingtoBVDV一2E2genesequencesaccessedinGenBank，apairofspecificprimerswasdesignedtoamplifyE2geneofSWisolate．Theamp

5、lifiedproductwasclonedintoTvectorandsequenced．AndthenE2genewassubclonedintoBI21(DE3)expressionvectorpET一28aforexpression．RecombinantplasmidpET一28a—E2wastransformedintoE．coli，AnalysisofSDS-PAGEandWesternblotwereconductedforexpressionproductsafterIPTGinduction．SDSPAGEconfirmedthatthere—combinantf

6、usionproteinwasexpressedwitharelativemolecularweightof32ku．Westernblotanalysisshowedthattherecombinantproteincanspecificallybereactivetoanti—BVDV一2polyclonalantibody，whichconfirmsthattherecombinantE2proteinisendowedwithgoodreactionogenicity．Thestudylaysafoundationfordevelopingdiagnosticreagents

7、forBVDV一2infection．Keywords：Bovineviraldiarrheavirus(BVDV)；E2genes；vectorconstruction；prokaryoticexpression牛病毒性腹泻／粘膜病(Bovineviraldiarrhea／主要特征的一种传染病⋯。BVDV属黄病毒科(Mucosaldisease，BVD／MD)是由牛病毒性腹泻病Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)成员，属内还毒(Bo