热处理对β-伴大豆球蛋白二级结构的影响-论文.pdf

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1、2013年第O4期吉林农业NO．04。2013(总第301期)JILINAGRICULTURE(CumulativetyNO．301)热处理对l3一伴大豆球蛋白二级结构的影响李岩涛，秦贵信，龙国辉(吉林农业大学，吉林长春130118)摘要：文章旨在研究热处理对i3一伴大豆球蛋白的二级结构的影响，通过傅里叶变换红外光谱(FTIR)结合SDS—PAGE凝胶电泳，Native—PAGE凝胶电泳研究了B一伴大豆球蛋白在热处理下的二级结构变化。研究结果表明，在60℃～100℃处理下，随温度升高，B一伴大豆球蛋白的二级结构中的Q一螺旋呈下降趋势，B折叠总体呈升高趋势，B一转角呈下降趋势

2、，无规卷曲呈升高趋势。关键词：大豆一伴球蛋白；温度：SDS～PAGE：Native—PAGE；傅里叶变换红外光谱；二级结构中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1674—0432(2013)一04—0079—2基金项目：本文系吉林省科技厅青年基金项目，项目编号：201i01119。‘大豆蛋白是人类摄食的重要蛋白来源之一，其资源丰富、醇、5％的冰醋酸)。营养价值高、原料成本低，近年来被广泛应用在食品工业中。大取样品15ul溶于15ul样品缓冲液，3000r·min离L,3min后上豆中约含35％～40％的蛋白质，根据其沉降系数的不同可分为四样。采用直流恒压电源：浓缩

3、胶电压为80V，分离胶电压为160V，大类，分别为2s、7S、1ls和15S组分。大豆B一伴球蛋白是7s电泳时间2～3h。组分中的主要成分，又称7s球蛋白，约占大豆中蛋白质总量的1．4．4SDS—PAGE凝胶电泳采用SDS—PAGE垂直电泳，12％的分离20％~30％。大豆B一伴球蛋白对大豆蛋白的乳化性等功能特性和营胶；5％的浓缩胶；电泳缓冲液为Tris一甘氨酸缓冲液(pH8．3，含养品质均起到重要作用。0．I％SDS)；样品缓冲液为0．05mol·L-1pH8．0Tris—HCL缓冲液(含天然大豆蛋白分子结构紧密，大量酶切位点藏于蛋白质分2％SDS，5％B—ME、10％甘

4、油和0．02％的溴酚兰)；0．25％的考马斯亮子内部，很难被蛋白酶水解对大豆蛋白进行变性处理，会使酶兰R一250甲醇水染色液；酸甲醇水脱色液(7．5％的甲醇、5％的冰醋解位点大大增加。_6经过热处理后的蛋白质其构象改变，结构展酸)。开，变得对酶更加敏感。蛋白质在变性过程中，其二级结构会发取经过热处理后样品15ul溶于15ul样品缓冲液，100℃加热生变化，检测这些变化的方法很多，目前常用的光谱法有圆二色5min，3000r·min离~,3min后上样。采用直流恒压电源：浓缩胶谱法(CD)、荧光光谱法、x射线衍射法(X-ray)和傅里叶变换电压为lOOV，分离胶电压为200V

5、，电泳时间l～2h。红外光谱法(FTIR)等，其中FTIR是最近2O年发展起来的一种新I．4．5傅里叶红外分析取大豆B一伴大豆球蛋白溶液加入~I]KBr的分析测试技术。⋯本文以FTtR是为主要手段并结合SDS—PAGE凝盐窗内，样品厚度为0．05ul，将样品池置于红外光谱仪的样品室胶电泳和Native—PAGE凝胶电泳探讨温度变化对大豆B一伴球蛋白内，并获得FTIR红外谱图。红外光谱仪为岛津FTIR一8400s傅立叶二级结构的影响，并对今后的研究进行合理的设想和探索。变换红外光谱仪，扫描范围为400~4000cm一，分辨率为4cm～，扫描次数4O次。1材料与方法1．1供试材

6、料2结果与分析实验大豆购自吉林农业大学春雨种子有限公司。2．1Native-PAGE凝胶电泳1．2主要仪器不同浓度大豆蛋白水热处理产物的Native—PAGE(图2)。在85—2控温磁力搅拌器(江苏金坛市金城国胜实验仪器样品槽中有大分子聚集体存在，在分离胶顶端还有另外一系列的厂)、PHS一3c型酸度计(上海伟业仪器厂)、层析柱(1lOom×聚集体。泳道N一70的条带非常深。泳道8O～100的条带明显比泳4．5am)、高速低温冷冻离心机(Sigma)、BS一160型自动收集器道N一70深。说明当温度升高至80~C时，亚基基本以聚集体形式存(上海沪西分析仪器厂)。在，而70～1

7、00时，依然有少量组分以亚基形式存在。与图l对应BIO-RAD电泳系统：美国B10一RAD公司、岛津FTIR一8400s傅立还原情况相比较，可以发现聚集体对应条带依然存在。叶变换红外光谱仪。1．3主要试剂甲叉双丙烯酰胺：Fluka分装，小牛腱I型胶原蛋白：Sigma公司，考马斯亮兰R一250：Sigma公司，次高分子量蛋白质标准品：上海伯奥生物科技有限公司，其他试剂均为分析纯。1．4试验方法1．4．1伴大豆球蛋白样品的制备参考赵元法，本试验采用等电点沉淀法、盐析法及琼脂糖凝胶SepharoseEL一6B层析体系制备