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《热处理对β-伴大豆球蛋白二级结构的影响-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、2013年第O4期吉林农业NO.04。2013(总第301期)JILINAGRICULTURE(CumulativetyNO.301)热处理对l3一伴大豆球蛋白二级结构的影响李岩涛,秦贵信,龙国辉(吉林农业大学,吉林长春130118)摘要:文章旨在研究热处理对i3一伴大豆球蛋白的二级结构的影响,通过傅里叶变换红外光谱(FTIR)结合SDS—PAGE凝胶电泳,Native—PAGE凝胶电泳研究了B一伴大豆球蛋白在热处理下的二级结构变化。研究结果表明,在60℃~100℃处理下,随温度升高,B一伴大豆球蛋白的二级结构中的Q一螺旋呈下降趋势,B折叠总体呈升高趋势,B一转角呈下降趋势
2、,无规卷曲呈升高趋势。关键词:大豆一伴球蛋白;温度:SDS~PAGE:Native—PAGE;傅里叶变换红外光谱;二级结构中图分类号:$565.1文献标识码:A文章编号:1674—0432(2013)一04—0079—2基金项目:本文系吉林省科技厅青年基金项目,项目编号:201i01119。‘大豆蛋白是人类摄食的重要蛋白来源之一,其资源丰富、醇、5%的冰醋酸)。营养价值高、原料成本低,近年来被广泛应用在食品工业中。大取样品15ul溶于15ul样品缓冲液,3000r·min离L,3min后上豆中约含35%~40%的蛋白质,根据其沉降系数的不同可分为四样。采用直流恒压电源:浓缩
3、胶电压为80V,分离胶电压为160V,大类,分别为2s、7S、1ls和15S组分。大豆B一伴球蛋白是7s电泳时间2~3h。组分中的主要成分,又称7s球蛋白,约占大豆中蛋白质总量的1.4.4SDS—PAGE凝胶电泳采用SDS—PAGE垂直电泳,12%的分离20%~30%。大豆B一伴球蛋白对大豆蛋白的乳化性等功能特性和营胶;5%的浓缩胶;电泳缓冲液为Tris一甘氨酸缓冲液(pH8.3,含养品质均起到重要作用。0.I%SDS);样品缓冲液为0.05mol·L-1pH8.0Tris—HCL缓冲液(含天然大豆蛋白分子结构紧密,大量酶切位点藏于蛋白质分2%SDS,5%B—ME、10%甘
4、油和0.02%的溴酚兰);0.25%的考马斯亮子内部,很难被蛋白酶水解对大豆蛋白进行变性处理,会使酶兰R一250甲醇水染色液;酸甲醇水脱色液(7.5%的甲醇、5%的冰醋解位点大大增加。_6经过热处理后的蛋白质其构象改变,结构展酸)。开,变得对酶更加敏感。蛋白质在变性过程中,其二级结构会发取经过热处理后样品15ul溶于15ul样品缓冲液,100℃加热生变化,检测这些变化的方法很多,目前常用的光谱法有圆二色5min,3000r·min离~,3min后上样。采用直流恒压电源:浓缩胶谱法(CD)、荧光光谱法、x射线衍射法(X-ray)和傅里叶变换电压为lOOV,分离胶电压为200V
5、,电泳时间l~2h。红外光谱法(FTIR)等,其中FTIR是最近2O年发展起来的一种新I.4.5傅里叶红外分析取大豆B一伴大豆球蛋白溶液加入~I]KBr的分析测试技术。⋯本文以FTtR是为主要手段并结合SDS—PAGE凝盐窗内,样品厚度为0.05ul,将样品池置于红外光谱仪的样品室胶电泳和Native—PAGE凝胶电泳探讨温度变化对大豆B一伴球蛋白内,并获得FTIR红外谱图。红外光谱仪为岛津FTIR一8400s傅立叶二级结构的影响,并对今后的研究进行合理的设想和探索。变换红外光谱仪,扫描范围为400~4000cm一,分辨率为4cm~,扫描次数4O次。1材料与方法1.1供试材
6、料2结果与分析实验大豆购自吉林农业大学春雨种子有限公司。2.1Native-PAGE凝胶电泳1.2主要仪器不同浓度大豆蛋白水热处理产物的Native—PAGE(图2)。在85—2控温磁力搅拌器(江苏金坛市金城国胜实验仪器样品槽中有大分子聚集体存在,在分离胶顶端还有另外一系列的厂)、PHS一3c型酸度计(上海伟业仪器厂)、层析柱(1lOom×聚集体。泳道N一70的条带非常深。泳道8O~100的条带明显比泳4.5am)、高速低温冷冻离心机(Sigma)、BS一160型自动收集器道N一70深。说明当温度升高至80~C时,亚基基本以聚集体形式存(上海沪西分析仪器厂)。在,而70~1
7、00时,依然有少量组分以亚基形式存在。与图l对应BIO-RAD电泳系统:美国B10一RAD公司、岛津FTIR一8400s傅立还原情况相比较,可以发现聚集体对应条带依然存在。叶变换红外光谱仪。1.3主要试剂甲叉双丙烯酰胺:Fluka分装,小牛腱I型胶原蛋白:Sigma公司,考马斯亮兰R一250:Sigma公司,次高分子量蛋白质标准品:上海伯奥生物科技有限公司,其他试剂均为分析纯。1.4试验方法1.4.1伴大豆球蛋白样品的制备参考赵元法,本试验采用等电点沉淀法、盐析法及琼脂糖凝胶SepharoseEL一6B层析体系制备
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