利用种子蛋白SDS-PAGE电泳谱带鉴定菜豆品种真实性与纯度的研究-论文.pdf

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1、北方园艺2014(07)：91～95·生物技术·利用种子蛋白SDS_PAGE电泳谱带鉴定菜豆品种真实性与纯度的研究张雪，李爽，韩玉珠(1．吉林农业大学园艺学院，吉林长春130118；2．吉林省农业科学院农村能源研究所，吉林长春130033)摘要：以不同采收年限的17个菜豆品种的种子为试材，采用sDS—PAGE电泳方法获得菜豆种子贮藏蛋白的电泳图谱，比较分析其真实性；同时研究种子蛋白SDS-PAGE技术鉴定菜豆品种真实性和纯度的可行性。结果表明：17个菜豆品种可以通过SDS-PAGE方法得到特征谱带A、B、C、D、E、F、G、H，且各品

2、种谱带差异明显；SDS—PAGE蛋白质电泳方法用于鉴定菜豆品种真实性和种子纯度是可行的。关键词：菜豆；SDS-PAGE；真实性；纯度中图分类号：S643．1文献标识码：A文章编号：1001-0009(2014)07-0091-05我国是重要的菜豆主产区，品种资源尤为丰富口]，白进行SDS-PAGE电泳，旨在为找到快速、准确鉴定菜但有些品种间从种子外形上来看极其相似。市场上出豆品种真实性和种子纯度方法提供参考，并为新品种选现的同名异物和同物异名的现象也屡见不鲜，种子真假育提供科学依据和技术支持。难辨，致使种子管理单位莫衷一是L2]。对于

3、育种工作，1材料与方法品种真实性和种子纯度鉴定是保证良种遗传充分发挥，1．1试验材料防止良种混杂退化，提高种子质量和产品品质的必要手供试的17份菜豆材料见表1，均由吉林农业大学园段l_3j。目前，我国主要以种子形态鉴定和田间小区种植艺学院蔬菜教研室种子库提供；17个菜豆品种分为2011鉴定为主，其缺点是易受环境条件影响，且生产周期长。年和2012年采收的菜豆种子，其来源为原种的获得。而电泳鉴定方法和分子标记鉴定方法在国内外已开始1．2试验方法应用。种子中的蛋白质组分是基因表达的产物，记录了试验于2012年1O月于吉林农业大学园艺学院生

4、物种在发育过程中的亲缘关系，以及种间与品种间的遗化实验室进行。重复试验20次。传差异[4]。目前，S【PAGE技术在亚基水平上对特定1．2．1不同品种间的SI)PAGE电泳方法样品的制蛋白质的分析已取得了显著的进展]，电场的电荷效备：试验试剂按照常规方法配置，Marker为北京鼎国盛应和凝胶的分子筛选效应使多肽的蛋白质在支持物上生物技术有限责任公司PM0033(220--~16kDa)。试验分产生不同的迁移速度而位于不同的位置通过染色形成别取在42℃下烘干36h的干种子1粒，去种皮，将去种不同的谱带口，其谱带较稳定，且均匀性较好，多态

5、性较皮后的种子研磨成粉末状，每粒种子称取0．052g子叶高。利用SDS-PAGE蛋白质电泳方法鉴定作物真实性粉末装入2mL离心管中，加人1mLSDS样品处理液，和纯度，已在辣椒L】、水稻l_1引、啤酒大麦口中获得成功，重蒸馏水定容至2mI，摇匀后在11000r／min下离心但在菜豆中的应用研究尚鲜见报道。该研究通过对不20min，取0．2mI上清液和0．3mL样品缓冲液加入同采收年限且种子形态相似的17个菜豆品种的贮藏蛋1．5mI离心管中，沸水浴3min，放于-20℃冰箱中冷冻保存，作电泳样品。SDS—PAGE电泳：每次点样前，样品第

6、一作者简介：张雪(1987一)，女，吉林省吉林市人，硕士研究生，研需要先沸水浴3min。电泳采用垂直电泳方法，参照生究方向为蔬菜遗传育种与生物技术。E—mail：494539447@物化学方法[1¨进行分离胶和浓缩胶浓度分别15和qq．corn．59，6。照相：电泳完成后，取出胶片，放人0．19／6考马斯亮责任作者：韩玉珠(1971一)，女，吉林长春人，教授，硕士生导师，现蓝染色液(1．0g考马斯亮蓝R-250溶解在250mI甲醇主要从事蔬菜遗传育种与生物技术等教学与科研工作。E-mail：中，冰醋酸1000mI，加入双蒸馏水定容至1

7、000mL)中固574857535@qq．corn．基金项目：长春市科技局资助项目(长科技合(2011230)号)。定染色一夜，次日待谱带清晰后，放入脱色液(50mI无水收稿日期：2013-11—13乙醇，100mI冰醋酸，加入双蒸馏水定容至1000mL)于91·生物技术·北方园艺2014(o7)：91495品种B、C、F带出现；15号F带出现，H带消失；16号品遗传物质较少受环境条件影响，而不同品种间的蛋白质种C、G带出现；17号品种C、F带出现，B带消失。G带在数量、结构、含量上也有所不同，所以，可以通过蛋白2012年比2011年

8、蛋白表达量有所增加，增加范围在电泳谱带加以区分，从而为品种真实性和纯度鉴定提供25~42ku，其它条带2012年的蛋白表达量也略有增加。参考。该研究表明，电泳谱带法是当前品种纯度和真实结果表明，贮藏年限时间越长，条带的蛋