穿心莲种子蛋白质电泳鉴定的初步研究论文

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1、穿心莲种子蛋白质电泳鉴定的初步研究论文【摘要】目的探讨SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对穿心莲种子进行鉴别的可行性，为穿心莲种子鉴别及育种研究提供科学依据。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对广东省几种不同来源和不同采收期的穿心莲种子进行可溶性蛋白质电泳研究。结果不同产地的穿心莲种子蛋白质电泳图谱之间在谱型和谱带的强弱、蛋白质相对含量上均有一定的差异，不同采收期穿心莲种子蛋白质电泳在蛋白质谱带的强弱上有一定差异。结论聚丙烯酰胺凝胶电泳技术可用于穿心莲种子鉴定。【关键词】穿心莲;聚丙烯酰胺凝胶电泳;种子;鉴定Abstract:ObjectiveToexpl

2、orethefeasibilityofseedidentificationidegelelectrophoresistechnologyeinGuangdong.ResultsSignificantdifferencesdifferentorigins,andinspectraldegreebete.ConclusionPolyacrylamidegelelectrophoresistechnologycanbeusedforseedidentificationofAndrographispaniculataseeds.Keyidegelelectropho

3、resis;seed;identification穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees为爵床科植物，具有清热解毒、凉血消肿等功能,临床上常用于急性菌痢、胃肠炎、感冒、流脑、气管炎、高血压等疾病的治疗1。研究表明，不同产地、不同采收期的穿心莲性状、成分差异较大，种子混杂现象也较严重2。中药材种子所含蛋白质的种类和数量携带了其长期演化的遗传特征，具有很高的稳定性和专属性.freelol·L-1Tris-HCl(pH=8.8)，1mol·L-1Tris-HCl(pH=6.8)，10%(质量浓度)SDS，50%(体积分数)甘油

4、，1%(质量浓度)溴酚蓝，考马斯亮蓝R-250染液(取0.04g考马斯亮蓝R-250，加入甲醇18mL、蒸馏水18mL和冰醋酸4mL，即得)，考马斯亮蓝脱色液(10mL甲醇、10mL冰醋酸和80mL蒸馏水混匀)，30%(质量浓度,下同)丙烯酰胺，0.8%N，N’-甲叉双丙烯酰胺，10%SDS，10%过硫酸铵，1%溴酚蓝。1.3方法1.3.1样品缓冲液的制备取1mol·L-1的Tris-HCl0.6mL，加入50%(体积分数)的甘油5mL、10%(体积分数)的SDS2mL、2-硫基乙醇0.5mL、1%(质量分数)溴酚蓝1mL和蒸馏水0.9mL，4℃冰箱中存放，

5、备用。1.3.2丙烯酰胺储存液100mL(A液)30%丙烯酰胺、0.8%双丙烯酰胺。1.3.34×分离胶缓冲液100mL(B液)2mol·L-1Tris-HCl75mL、10%SDS4mL，蒸馏水21mL。1.3.44×浓缩胶缓冲液100mL(C液)取1mol·L-1Tris-HCl50mL，加入10%SDS4mL，再加入蒸馏水46mL，即得。1.3.55%浓缩胶蒸馏水2.3mL，A液0.67mL，C液1.0mL，10%过硫酸铵30μL，TEMED5μL。1.3.612%分离胶A液4mL，B液2.5mL，蒸馏水3.5mL，10%过硫酸铵50μL，TEMED5

6、μL。1.3.7样品溶液的制备8取穿心莲种子0.5g，加入稀释5倍的样品缓冲液(pH6.8)2mL，3%聚乙烯毗咯烷酮(PVP)，冰浴下研磨，加入稀释4倍的5%浓缩胶缓冲液1mL，振摇，混匀，超声20min，室温离心20min(4000r·min-1)。取上清液，离心20min(4000r·min-1)，取上清液，加入石油醚2mL，振摇2min，静止分层。吸取下层液体，加入适量冷丙酮，振摇，置4℃冰箱30min，取出，离心5s(4000r·min-1)，弃去丙酮，风干。沉淀物加入样品缓冲液2～3mL，振摇2min，超声5～10min，待溶解完全后，室温下离心

7、5min(4000r·min-1)，取上清液，置4℃冰箱中存放，备用。1.3.8电泳缓冲液的配制取Tris碱3g、甘氨酸14.4g和SDS1g，加入蒸馏水至1L，pH8.3，在4℃冰箱中存放，备用。1.3.9电泳操作采用1mm厚的SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳，浓缩胶浓度为5%，分离胶浓度12%，电极缓冲液为Tris-甘氨酸，pH8.3。用微量注射器分别取样品液25μL，注入样品槽底部，点样结束后向上槽内加入1滴溴酚蓝指示剂示踪。起始电压控制在120V，样品进入分离胶后，电压调整为200V，待指示剂距前沿约1cm时，停止电泳，迅速取出胶板，标记前沿。1.3

8、.10染色和脱色取出胶板后，用蒸馏水冲洗，随即放入考