微生物的培养与应用(2课时).ppt

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1、微生物的培养与应用考点1.微生物的分离与培养2.测定某种微生物的数量3.研究培养基对微生物的选择作用4.探讨微生物的利用主要技术：1.培养基的制备2.高压蒸汽灭菌和干热灭菌3.倒平板操作4.平板划线操作和稀释涂布平板法5.应用选择培养基分离某种特定的微生物微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识归纳：自养型生物有什么共同特点？营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生

2、素六类。植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。什么是营养物质？选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞4.无菌技术消毒方法：（1）日常生活经常用到的是消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用消毒法（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒等溶液以增强消毒效果，然后使用进行物理消毒

3、。（4）实验操作者的双手使用进行消毒；（5）饮水水源用进行消毒。煮沸巴氏石炭酸或煤酚皂紫外线酒精氯气灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用法，所用器械是；（3）培养基、无菌水等使用灭菌法，所用器械是。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用灭菌法，所用器械是。灼烧干热灭菌箱干热灭菌高压蒸汽高压蒸汽灭菌锅紫外线紫外灯小结：微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存5.菌种的保存①临时保藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃

4、的冰箱中保藏。以后每3～6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。②长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。-20℃下保存1.（09辽宁、宁夏卷）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、_____________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_

5、____________________。温度酸碱度易培养生活周期短灭菌消毒损伤DNA的结构（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。比例合适鉴定(或分类)（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是__________________________________________________________________________

6、________。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。将未接种的培养基(接种无菌水）在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生.灭菌测定微生物数量的方法：1)直接计数法：最常用的显微镜直接计数。优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。缺点：不能区分死菌和活菌；难以计数微小的细菌。一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。6.统计菌落数目2）间接计数法：最常用稀释涂布平板计数法应用：统计样品中活菌的数目①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上

7、的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（注意）：一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。②操作：a、设置重复组：增强实验的说服力和准确性。空白对照：指不做任何实验处理的对象组。对照的种类自身对照：指实验与对照在同一对象上进行，即不另设对照组。如“植物细胞质壁分离和复原”实验，就是典型的自身对照。自身对照，方法简便，关键是要看清楚实验处理前后现象变化的差异，实验处理前的对象状况为对照组，实验处理后的对象变化则为实